トランスフォーメーション |
↓氷上でコンピテント細胞(DH5α:大腸菌株)を融かす |
↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに100 μlのコンピテント細胞を分注する、余ったコンピテント細胞は-80 ℃の冷凍庫に戻す | </td>
↓DNAをチューブに1~5 μl加えて、氷上で30分間冷やす | </td>
↓42 ℃で45秒間熱ショックを与える | </td>
↓0.9 mlのSOC培地を加える | </td>
↓37 ℃で1時間、振りながら回復培養する | </td>
↓1 mlをLBプレート(+amp,+kan,+camのいずれか)にまく | </td>
↓37 ℃で一晩培養する | </td>
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Bacterial transformation |
↓Thaw competent cells(DH5 Alpha:E.coli strain) on ice. |
↓Aliquot 100 μl cells into pre-chilled 1.5 ml tube.Put excess competent cells back into the -80℃ freezer. | </td>
↓Add DNA (1 to 5 μl) to tube, incubate on ice for 30 minutes. | </td>
↓Heat shock the cells at 42 ℃ for 45 seconds. | </td>
↓Add 0.9 ml SOC medium. | </td>
↓Rescue at 37 ℃ for 1 hour, shaking. | </td>
↓Spread 1 ml on LB plates(Either +amp,+kan or +cam) | </td>
↓Clutivate overnight in 37 ℃ . | </td>
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