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Template:KIT-Kyoto-Augsut26
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| + | ::桂川国際特許事務所[http://www.ekouhou.net/%E6%8A%97%E4%BD%93%E3%81%BE%E3%81%9F%E3%81%AF%E5%A5%BD%E4%B8%AD%E7%90%83%E3%82%92%E4%BB%8B%E3%81%99%E3%82%8B%E3%82%AA%E3%82%BE%E3%83%B3%E7%94%9F%E6%88%90/disp-A,2006-506613.html 「抗体または好中球を介するオゾン生成」]</TD></TR></TABLE> | ||
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| + | :(2) pSB1A2(E0430)はすべてバンドが見えたので、 | ||
| + | ::バンドの一番濃かった左から4番目のものを3mLのLB培地(amp+)で37℃で振とう培養した(overnight) | ||
| + | ::pSB1A2(J22005)は左から6番目と7番目がバンドが見えたので、 | ||
| + | ::7番目のものを3mLのLB培地(amp+)で37℃で振とう培養した(overnight) | ||
| + | ::RFP(I13507)はバンドが現れなかった | ||
| + | :(3) PCR処理を行った4つ全てについてSodAが十分量含まれていることが27日(金)の電気泳動によりわかった | ||
Revision as of 04:26, 17 September 2010
August 26
【時間】
- 9:00～
【実験担当】
- 岩城,竹内,中村,臼井,足立
【実験名】
- (1) 大腸菌の生存曲線を調べる
- (2) pSB1A2(E0430),pSB1A2(J22005),RFP(I13507)の制限酵素処理
- (3) SodAのPCR処理
【実験目的】
- (1) 大腸菌の生存曲線を調べ(2日目)、生存曲線を作成
- (2) 前日にアルカリミニプレップしたpSB1A2(E0430),pSB1A2(J22005),RFP(I13507)を制限酵素で処理、処理の確認(電気泳動)
- (3) SodAのプロモーターをPCRによって増幅
【実験内容】
- (1) 大腸菌の生存曲線を調べる
- 前日まいたコロニーの数を数え、今までのデータを統計、生存曲線を作成した
- (2) pSB1A2(E0430),pSB1A2(J22005),RFP(I13507)の制限酵素処理
右表の組成で制限酵素処理を行い、37℃で1時間インキュベートした
↓結果を写真撮影した
↓電気泳動を以下の方法で行った
1×ladderをマーカーとし、一番左のコームに流した
↓Loading Buffer1μLに対しpSB1A2(E0430),pSB1A2(J22005),RFP(I13507)を
ぞれぞれ5μLの割合で加え左から2∼4番目にpSB1A2(E0430)、5~7番目にpSB1A2(J22005)、
8番目(右端)にRFP(I13507)をそれぞれコームに流した
＜組成＞ EcoRⅠ lμL PstⅠ 1μL プラスミドDNA 5μL 10×H Buffer 2μL H2O 11μL 全量 20μL
- (3) SodAのPCR処理
下表の組成でテンプレートDNAにDH5αを使用したものを2本(DH5α-1,DH5α-2)、
JM109を使用したものを2本(JM109-1,JM109-2)作製した
↓以下のプログラムでPCR処理を行った＜PCR試薬の組成＞ SodA PrimerF 1.5μL PrimerR 1.5μL dNTPs 5μL KOD-Plus- Buffer 5μL テンプレートDNA
(DH5α,JM109)0.5μL MgSO4 4μL H2O 31.5μL KOD-Plus- 1μL total 50μL
Pre Denature Denature Annealing Extention +Extention 94℃ 94℃ 62.2℃ 68℃ 68℃ 4℃ 2min 15sec 30sec 1min 2min 保持 30サイクル
- (1) 計測した結果を以下にまとめた
[H2O2] 0mM 1nM 10nM 100nM 1μM 10μM 100μM 1mM 10mM 100mM コロニー数 231 220 165 133 109 80 31 1 0 0
- これを元に、大腸菌の生存曲線を作成した
- これを元に、大腸菌の生存曲線を作成した
- 以下の引用文献を参考に、得られた結果は正しいと判断した
- 図17Bは、大腸菌XL-ブルーおよびO-112a,c血清型の
生存能力に対するH2O2の濃度依存的毒性を示す
- <引用文献>
- 桂川国際特許事務所[http://www.ekouhou.net/%E6%8A%97%E4%BD%93%E3%81%BE%E3%81%9F%E3%81%AF%E5%A5%BD%E4%B8%AD%E7%90%83%E3%82%92%E4%BB%8B%E3%81%99%E3%82%8B%E3%82%AA%E3%82%BE%E3%83%B3%E7%94%9F%E6%88%90/disp-A,2006-506613.html 「抗体または好中球を介するオゾン生成」]
- (2) pSB1A2(E0430)はすべてバンドが見えたので、
- バンドの一番濃かった左から4番目のものを3mLのLB培地(amp+)で37℃で振とう培養した(overnight)
- pSB1A2(J22005)は左から6番目と7番目がバンドが見えたので、
- 7番目のものを3mLのLB培地(amp+)で37℃で振とう培養した(overnight)
- RFP(I13507)はバンドが現れなかった
- (3) PCR処理を行った4つ全てについてSodAが十分量含まれていることが27日(金)の電気泳動によりわかった
