"
Team:Warsaw/Calendar-Stage1/12 July 2010
From 2010.igem.org
Monday, 12 June 2010
1. Dokończenie minilizy z soboty 10.07: 2.1, 3.1, 4.1, 5.1, 6.1
2. Trawimy part 12.1 J23100 z promotorem [Bcu (Spe) + Pst], gel out
3. Trawimy party z RBSami nie zawierającymi promotorów (RBS+GFP) 7.2 G, 8.1 E, 9.1 A, 11.1 P, 10.1 F [Xbal + Pst]
Elektroforeza, żel-out, ligacja z partem 12.1 J23100 po gel-oucie i transformacja mieszaniny ligacyjnej.
4. Trawimy 2.1, 3.1, 4.1, 5.1, 6.1 (RBS Andersona + GFP) [Eco +Pst] w celu sprawdzenia poprawności konstruktów. Elektroforeza.
Wszystkie klony są poprawne ( potrzebne zdjęcie żelu!) Elektroforeza – zdjęcie (opis zdjęć wg kolejności naniesionych próbek): 1-szy żel: 2.1, 3.1, 4.1, 5.1, 6.1 2-gi żel: 7.2, 8.1, 9.1, 10.1 3-ci żel: 11.1, 12.1 5. Trawimy part 3.1 – Anderson z bricków (wektor ekspresyjny, zawierający najsilniejszy RBS), która posiada RFP [Spe/Pst] 6. Trawienie białek fluorescencyjnych [Xba/ Pst], klonujemy pod wektor ekspresyjny. Białka fluorescencyjne: - GFP E240 - CFP E0420 - YFP E0430 - mOrange E2050* / klonujemy bez RBS-u - mCherry J67102*/ klonujemy bez RBS-u - mCherry NLS J130012 * może zawierac internal RBS. Sprawdzic – podklonowac pod promotor. Gel – out tych bricków, ligacja z wektorem ekspresyjnym i transformacja Warunki trawienia: 8 μl DNA 2 μl buforu 10 μl H2O 0,3 μl enzymów 20 μl reakcji
Cloning GFP+terminator behind Anderson's RBSes
1. Dokończenie minilizy z soboty 10.07: 2.1, 3.1, 4.1, 5.1, 6.1
Cloning Connumity RBSes+GFP+terminator behind 23100
2. Trawimy part 12.1 J23100 z promotorem [Bcu (Spe) + Pst], gel out
3. Trawimy party z RBSami nie zawierającymi promotorów (RBS+GFP) 7.2 G, 8.1 E, 9.1 A, 11.1 P, 10.1 F [Xbal + Pst]
Elektroforeza, żel-out, ligacja z partem 12.1 J23100 po gel-oucie i transformacja mieszaniny ligacyjnej.
4. Trawimy 2.1, 3.1, 4.1, 5.1, 6.1 (RBS Andersona + GFP) [Eco +Pst] w celu sprawdzenia poprawności konstruktów. Elektroforeza.
Wszystkie klony są poprawne ( potrzebne zdjęcie żelu!) Elektroforeza – zdjęcie (opis zdjęć wg kolejności naniesionych próbek): 1-szy żel: 2.1, 3.1, 4.1, 5.1, 6.1 2-gi żel: 7.2, 8.1, 9.1, 10.1 3-ci żel: 11.1, 12.1 5. Trawimy part 3.1 – Anderson z bricków (wektor ekspresyjny, zawierający najsilniejszy RBS), która posiada RFP [Spe/Pst] 6. Trawienie białek fluorescencyjnych [Xba/ Pst], klonujemy pod wektor ekspresyjny. Białka fluorescencyjne: - GFP E240 - CFP E0420 - YFP E0430 - mOrange E2050* / klonujemy bez RBS-u - mCherry J67102*/ klonujemy bez RBS-u - mCherry NLS J130012 * może zawierac internal RBS. Sprawdzic – podklonowac pod promotor. Gel – out tych bricków, ligacja z wektorem ekspresyjnym i transformacja Warunki trawienia: 8 μl DNA 2 μl buforu 10 μl H2O 0,3 μl enzymów 20 μl reakcji
blablabla temat2
