Template:KIT-Kyoto-Augsut23

(Difference between revisions)

Revision as of 11:11, 3 October 2010

Time

9:00～21:00

Member

岩城,竹内,中村,臼井,吉村

Iwaki,Takeuchi,Nakamura,Usui,Yoshimura

Title

(1)　大腸菌の生存曲線を調べる　[吉村]　

(2)　dps,grxA,trxCおよびoxyRのPCR+電気泳動によるチェック　[中村、臼井]

(3)　dps,acrABのDNA濃度測定　[中村、臼井]

Purpose

(1)　大腸菌の生存曲線を調べる

(2)　活性酸素応答のプロモーターをPCRで増やし、ちゃんと増えたかを泳動でチェック

(3)　dps,acrABのDNA濃度を測定し、PCRして増やすのに十分な濃度であるかを確認する。

Method

(1)　大腸菌の生存曲線を調べる

　30％ H2O2(500μl)とミリQ(600μl)で4MのH2O2をつくった

　↓4M H2O2(250μl)とミリQ(750μl)で1MのH2O2をつくった

　↓以下10倍希釈していき、1nM H2O2まで作成した

　次にDH5αのシングルコロニーをピックアップした

　↓LB(-amp)2mlでプレカルチャーを行った

　↓(37℃でインキュベート、overnight)

(2)　dps,grxA,trxCおよびoxyRのPCR+電気泳動によるチェック

　dps,grxA,trxCおよびoxyRのPCRを以下の組成、設定で行った

またPCR後、それぞれ電気泳動によるチェックを以下の条件で行った
　1回目　100V、20min　EtBr　20min
　2回目　135V、15min　EtBr　10min

(3)　dps,acrABのDNA濃度測定

　吸光計により、dpsとacrABのOD260を5回測定し、その平均をとった

Results

(1)　実験結果は25日のノートに記載した

(2)　1回目の電気泳動で、grxA、trxC のバンドがほとんど確認されなかった

2回目を行ったところ、1回目よりはバンドがよく見えたが、十分に増えたとは言えなかった

＊詳細は写真参照

(3)　吸光度の測定結果

以下の吸光度の結果から、PCRが十分と判断された

@@ Line 1: / Line 1: @@
 == August 23 ==
+<div align="right"><span style="font-size:10pt;">[[#notebook|>>top]]</span></div>
 '''Time'''
 :9:00～21:00
@@ Line 46: / Line 46: @@
 <TD>DNA（DH5α）</TD><TD>0.5μL</TD><TD></TD><TD>DNA（DH5α）</TD><TD>2μL</TD></TR>
 <TR>
-<TD>MgSO4</TD><TD>4μL</TD><TD></TD><TD>MilliQ</TD><TD>20μL</TD></TR>
+<TD>MgSO<SUB>4</SUB></TD><TD>4μL</TD><TD></TD><TD>MilliQ</TD><TD>20μL</TD></TR>
 <TR>
 <TD>MilliQ</TD><TD>31.5μL</TD><TD></TD><TD>KOD－FX</TD><TD>2μL</TD></TR>