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Template:KIT-Kyoto-Augsut16
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:(1) プラスミドを大量に回収するためにpSB3K3(J04450),pSB6A1(J04450)を培養する [臼井、中村、足立] | :(1) プラスミドを大量に回収するためにpSB3K3(J04450),pSB6A1(J04450)を培養する [臼井、中村、足立] | ||
:(2) 目的のインサートを持たないpSB1A2(J44000)を増やしていたため、 | :(2) 目的のインサートを持たないpSB1A2(J44000)を増やしていたため、 | ||
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:(3)過酸化水素応答プロモーターをPCR処理によって得るためのプライマーを設計する | :(3)過酸化水素応答プロモーターをPCR処理によって得るためのプライマーを設計する | ||
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:(1) pSB3K3(J04450),pSB6A1(J04450)の培養 | :(1) pSB3K3(J04450),pSB6A1(J04450)の培養 | ||
:: プレート培地上のコロニーからpSB3K3(J04450),pSB6A1(J04450)をピックアップし、 | :: プレート培地上のコロニーからpSB3K3(J04450),pSB6A1(J04450)をピックアップし、 | ||
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::過酸化水素応答プロモーター配列をiGEM推奨のサイトGinkgo Bioworksを用いて編集し、プライマーを設計した | ::過酸化水素応答プロモーター配列をiGEM推奨のサイトGinkgo Bioworksを用いて編集し、プライマーを設計した | ||
| - | + | '''Results''' | |
:(1) プラスミドを抽出するのに十分な増殖が肉眼で確認できた | :(1) プラスミドを抽出するのに十分な増殖が肉眼で確認できた | ||
:(2) コロニーが生育した | :(2) コロニーが生育した | ||
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::SodA,ProxyRに関してはPCR処理でうまく得ることができなかった | ::SodA,ProxyRに関してはPCR処理でうまく得ることができなかった | ||
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:(1) 翌日、プラスミド抽出を行う | :(1) 翌日、プラスミド抽出を行う | ||
:(2) 翌日、シングルコロニーピックアップを行う | :(2) 翌日、シングルコロニーピックアップを行う | ||
:(3) プライマー設計時に何かしらの間違いがあったものと考えられるが詳細はいまだ不明 | :(3) プライマー設計時に何かしらの間違いがあったものと考えられるが詳細はいまだ不明 | ||
Revision as of 05:55, 27 September 2010
August 16
Time
- 9:00～17:00
Member
- 岩城,福山,竹内,臼井,足立,中村,革島
- Iwaki,Fukuyama,Takeuchi,Usui,Adachi,Nakamura,Kawashima
Purpose
- (1) プラスミドを大量に回収するためにpSB3K3(J04450),pSB6A1(J04450)を培養する [臼井、中村、足立]
- (2) 目的のインサートを持たないpSB1A2(J44000)を増やしていたため、
- pSB1A2(E0240)をトランスフォーメーションしなおす
- また、パーツ登録時に必要なpSB1C3(J04450)のトランスフォーメーションをする [臼井、中村]
- (3)過酸化水素応答プロモーターをPCR処理によって得るためのプライマーを設計する
Method
- (1) pSB3K3(J04450),pSB6A1(J04450)の培養
- プレート培地上のコロニーからpSB3K3(J04450),pSB6A1(J04450)をピックアップし、
- 各2本ずつ、それぞれYT培地30ml(+kan)・YT培地30ml(+amp)を使用し、37℃,overnightで振とう培養した
- (2) pSB1A2(E0240)及びpSB1C3(J04450)のトランスフォーメーション
- DH5αを on ice 10分
- ↓pSB1A2(12-M)及びpSB1C3(3-A)をそれぞれ1μLずつ加え、on ice 30min.
- ↓42℃で45秒間ヒートショックを行った
- ↓on ice 2min.
- ↓37℃に温めたSOC培地0.9mLを加え、37℃シェーカーで1時間振とう培養を行った
- ↓培養した菌液全量をプレートにまいた
- ↓37℃でインキュベートした(Overnight)
- (3) プライマーの設計
- 過酸化水素応答プロモーター配列をiGEM推奨のサイトGinkgo Bioworksを用いて編集し、プライマーを設計した
Results
- (1) プラスミドを抽出するのに十分な増殖が肉眼で確認できた
- (2) コロニーが生育した
- (3) 後日、AcrABはPCR処理で上手く得ることができたが、
- SodA,ProxyRに関してはPCR処理でうまく得ることができなかった
Consideration
- (1) 翌日、プラスミド抽出を行う
- (2) 翌日、シングルコロニーピックアップを行う
- (3) プライマー設計時に何かしらの間違いがあったものと考えられるが詳細はいまだ不明
