Team:Chiba/lux promoter

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Revision as of 16:11, 27 October 2010

Abstract

BBa_R0061は-35および-10の間にlux box を含む配列である。継続的に下流遺伝子の転写を行う。しかしながら，LuxR-AHL複合体によって下流の遺伝子転写を抑制する。
私たちは，Plux invの下流にRBSおよびGFP遺伝子を挿入したプラスミド (Plux inv-GFP) を作製し，抑制機能を確認した。
Biobrick number R0061 contains lux box between -35 and -10 and fuctions LuxR-AHL inverter.

We've prepare Plux inv-GFP and characterized about it.

Experiments

1.Preparing Plux inv-GFP

Preparing Plux inv-GFP process is shown in Fig. 1.Plux inv-GFPを形質転換した株はGFPの蛍光が確認されたので，Plux inv-GFPは機能している。 and sequence is conformed.

Fig. 1 cloning process

2.Characterization Plux inv-GFP

Plux inv-GFP およびLuxR generatorである Plac-LuxRをDH10B株に共形質転換した。コロニーをつついてLB液体培地(AHL0および1000 nM)で12 h培養し, スピンダウンしてペレットを観察した。

Fig. 2 assay protocol

Results

Reference

Egland.K.A, and Greenberg.E.P, Conversion of the Vibrio Fischeri Transcriptional Activator,LuxR, to a Repressor, J. Bacteriol., 182, P.805-811 (2000)
Cox.R.S.3rd, Surette.M.G, Elowitz.M.B, Programming gene expression with combinatorial promoters, Mol Syst Biol, 3 ,145 (2007)

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 ===2.Characterization Plux inv-GFP===
-Plux inv-GFP およびLuxR generatorである Plac-LuxRをDH10B株に共形質転換した。コロニーをつついてLB液体培地で12 h培養した。スピンダウンしてペレットを観察した。
+Plux inv-GFP およびLuxR generatorである Plac-LuxRをDH10B株に共形質転換した。コロニーをつついてLB液体培地(AHL0および1000 nM)で12 h培養し,
-[[Image:lux inverter function.png|frame|center|Fig. 2 assay process]]
+スピンダウンしてペレットを観察した。
+[[Image:lux inverter function.png|frame|center|Fig. 2 assay protocol]]
 ==Results==