Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August13

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=PCR=
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Revision as of 14:52, 18 September 2010

Notebook


PCR

ミニプレで増えなかったパーツのPCR

反応液の組成

Autoclaved DW : 33 uL
10x PCR buffer : 5 uL
2 mM dNTPs : 5 uL
25 mM MgSO4 : 3 uL
EX-F primer : 1 uL
PS-R primer : 1 uL
KOD plus Neo : 1 uL
Template (1-18F) : 1 uL
Total : 50 uL

primerの除去

  1. PCR products 50 uLにTE 150 uLを加え，ろ過用のチューブ（Microcon YM-10）に入れ，14000Gで20分間遠心した．
  2. 十分量ろ過されていなかったので，もう10分遠心した
  3. ろ液を測ると140 uLだっため，さらに10分遠心した
  4. なんかまだびみょうだったからもう10分遠心した
  5. DNAを含む溶液が19 uLになったため，31 uLのTEを加え総量50 uLにした

電気泳動

HokkaidoU Japan 20100813a.jpg
  1. primerなどを除去したDNA溶液 1 uLに6x Sample Buffer 0.4 uLを加え，泳動した
  2. 同時に，ろ液 10 uLに6x Sample Buffer 2 uLを加えたものも遠心した
  • マーカーはpUC119/Hinf
  • PCRでDNAが増幅されたことが確認された(543 bpと1330 bpの間に約700 bpのPCR産物)
  • 油断して45分間泳動したため，同時に流したprimerを含むろ液は流れた
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