Template:KIT-Kyoto-Augsut24

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'''Purpose'''  
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:# The survivorship curve of E. coli is examined. [Yoshimura]
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:# Confirmation of PCR products(dps and AcrAB) by Agarose gel electrophoresis.[Nakamura,Usui]
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:# Dps and AcrAB digestion by restriction enzymes.[Nakamura,Usui]
:(1) 大腸菌の生存曲線を調べる(2日目) [吉村]
:(1) 大腸菌の生存曲線を調べる(2日目) [吉村]
:(2) dps、acrABの電気泳動によるPCRの確認 [中村、臼井]
:(2) dps、acrABの電気泳動によるPCRの確認 [中村、臼井]

Latest revision as of 11:13, 25 October 2010

August 24

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Time

9:00~21:00

Member

岩城,竹内,中村,臼井,吉村
Iwaki,Takeuchi,Nakamura,Usui,Yoshimura

Purpose

  1. The survivorship curve of E. coli is examined. [Yoshimura]
  2. Confirmation of PCR products(dps and AcrAB) by Agarose gel electrophoresis.[Nakamura,Usui]
  3. Dps and AcrAB digestion by restriction enzymes.[Nakamura,Usui]
(1) 大腸菌の生存曲線を調べる(2日目) [吉村]
(2) dps、acrABの電気泳動によるPCRの確認 [中村、臼井]
(3) dps、acrABの制限酵素処理 [中村、臼井]

Method

(1) 大腸菌の生存曲線を調べる(2日目)
 前日にプレカルチャーしたLB 2 mlにLB(-amp)(2ml)を加え濃度調整、濁度を計った
 ↓O.D.600=0.4~0.6まで培養することを目的とした
  10:00 O.D.600=0.310
  11:30 O.D.600=0.908 (濁度が高すぎたため、この溶液5mlをLB20mlに植え継ぎ培養しなおした)
  11:50 O.D.600=0.152
  13:00 O.D.600=0.502 (目的の濃度に達したため、培養を停止した)
 ↓培養後、2mlずつ分注し、それぞれにH2O2を加えた
 ↓加えた後、37℃で1時間培養した
 ↓培養後、LB1mlに培養液をそれぞれ1μlずつ分注し、その内10μlをLBプレートにまいた
 ↓37℃でインキュベートを行った(overnight)
(2) dps、acrABの電気泳動
 前日にPCRしておいたdps、acrAB(50μL×2本ずつ)を電気泳動し、EtBr処理の後、写真を撮影した
 その条件を以下に示す
<条件>
DNA 10μL
1%アガロースゲルで135V、15min
EtBr処理 10min
(3) dps、acrABの制限酵素処理
 PCR後のdps、acrABをライゲーション用に制限酵素処理を行った
 制限酵素処理の組成を以下に示す
<組成>
DNAsol 40μL
1×H.Buffer 5μL
EcoRⅠ 1μL
SpeⅠ 1μL
H2O 3μL
これを、37℃で3.5hインキュベートした後、冷蔵保存した

Results

(1) 実験結果は25日に記載
(2) 薄いバンドが目的の位置に確認された
*詳細は写真参照
(3) 制限酵素処理済のdps、acrABは25日にライゲーションを行う予定