Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August30

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Notebook

pUC119のEcoR I, Pst I digestion

HokkaidoU Japan 20100830a.jpg
－ EcoR I Pst I EcoR I, Pst I 古いEcoR I
DNA solution 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL
DW 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 14 uL
10x M buffer 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
0.1% BSA － 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
EcoR I － 1 uL － 1 uL 1 uL
Pst I － － 1 uL 1 uL －
Total 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL

→37℃, 60 min
→2 uLを電気泳動で確認

  • バカ橋さんがDNAを入れ忘れたためやりなおし
  • 残った18 uLにDW1 uLとDNAを加えて

→37℃, 60 min
→2 uLを電気泳動で確認（+ 0.4 uL 6x SB）

電気泳動

レーン
2 λ/Hind III, EcoR I（4 uL使用）
3 切ってない
4 EcoR I
5 Pst I
6 EcoR I + Pst I
7 古いEcoR I
  • レーン３ではモノマー，ダイマー，トライマーなどのプラスミドが見られる．
  • レーン４～７ではこれらが切れているのが分かる
    • リニアになったので，モノマーの環状DNA（超コイル）より流れにくい


ラオリプライマーで作ったパーツも同様にdigestion

　 RBS dT GFP
DNA 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL
DW 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL
10x M buffer 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
0.1% BSA 0 uL 2 uL 2 uL 2 uL 0 uL 2 uL 2 uL 2 uL 0 uL 2 uL 2 uL 2 uL
EcoR I 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL
Pst I 0 uL 0 uL 1 uL 1 uL 0 uL 0 uL 1 uL 1 uL 0 uL 0 uL 1 uL 1 uL
Total 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL
HokkaidoU Japan 20100830b.jpg

→同様にインキュベート＆電気泳動

電気泳動

  • レーン２のマーカーはλ/Hind III, EcoR I．
  • レーン３のマーカーは50bp のラダーマーカー
  • レーン５からは上の表の通り
  • ちゃんと切れてる
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