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From 2010.igem.org

August 11

【時間】

9:00～18:00

【実験担当】

岩城,福山,竹内,臼井,足立

【実験目的】

電気泳動の練習をした

【実験内容】

(1)　Agarose 0.2g

TEA 20μL

を用いて1% Agarose Gel 作成をした。

(2)プラスミドDNA(練習用)5μL(μg/μLで)

Marker 1μL(何のマーカー？）

Loading Buffer 1μL(組成)

を混ぜ、5μLずつgelにapply、

一番左のレーンにはMarker　5μLをapplyした

(3)　100V,30minで電気泳動した。

(4)　EtBr(濃度を書く)にGelを20min浸けた。

(5)　Band撮影、Cut Checkをした。

August 12

【時間】

9:00～18:00

【実験担当】

岩城,福山,竹内,臼井,足立

【実験名】

(1)　pSB6及びpsB1(非パーツ)のプレカルチャー

(2)　pGVBpttの電気泳動

(3)　psB3K3(J04450)のトランスフォーメーション

【実験目的】

(1)　pSB6A1(K121013)及びpsB1(非パーツ)のプレカルチャー

(2)　pGVBpttが正しく制限酵素処理されているかどうかを確認するため

(3)　psB3K3(J04450)のトランスフォーメーション

【実験内容】

(1)　pSB6及びpsB1(非パーツ)のプレカルチャー

　DH5α-pSB6,DH5α-pSB1をそれぞれ液体LB培地(+amp)2mLで培養した

(2)　pGVBpttの電気泳動

＜組成＞ pGVBppt 5μL KpmI 1μL HindⅢ 1μL Buffer M 1μL H2O 11μL 計 20μL

これを37℃で1時間インキュベートした ↓Loading Buffer 1μLを加えたものとマーカー(1kbp radder)を 　1% Agarose Gelのコームに流し込んだ ↓100Vで30分間泳動した ↓EtBr(10mg/mL)で20分間染色した ↓泳動結果を写真で撮影した

(3)　psB3K3(J04450)のトランスフォーメーション

　psB3K3にSOCを0.9mL加え、DH5αにトランスフォーメーションした

　↓37℃でインキュベートした(Overnight)