Team:UT-Tokyo/Protocol

Protocol

前培養/トラフォメ（形質転換）

コロニーピックアップ・前培養

プラスミド精製（Miniprep・ミニプレ）

制限酵素処理（Xba1/Pst1）—同時にやるとき

制限酵素処理—ひとつずつやるとき

PCR（Pfu 　Ultra）

PCR（Ex- Taq）

PCR（KODplus）

コロニー PCR（Ex-Taq）

電気泳動

ゲルから切り出し・プラスミド精製

LB　 broth

アガロースゲル

シークエンス

コンピテントセルの作り方

例．

Transformation

preparation

-iGEM parts / ligation products

-LBbroth (No antibiotic)　500uL

・TE　15uL

・competent cells

・plates

・ice box

・heat block(42℃)

-Notice

competent cells

→ always onice!!! Melt on ice! Mix DNA as soon as cells melt!

-Protocol

iGEMパーツを解凍する場合 ↓P200のピペットマンにチップを付け、チップでフィルムに孔を空ける。 ↓add 15µl TE（MilliQで可）、ピペッティング ↓1µlをコンピテントセルにいれ30min　on　ice(コンピに対し1/5倍量以下になるように) ↓42℃45sec（終わったらon　ice） ↓10分くらい待つ ↓エッペンにLBbroth300µl加える ↓37℃30min（ampなら省略可能） ※常温15minでも可 ↓プレートに撒く

３７℃でインキュベーション

プレートはふたを下にしてインキュベーションする

8/6更新

Ligation products

↓ライゲーション産物10ulに対し、コンピテントセル50ｕlを混合

↓よく混ぜてonice30分

↓42℃45sec（終わったらon　ice） ↓10分くらい待つ ↓エッペンにLBbroth300µl加える ↓37℃30min（ampなら省略可能） ※常温15minでも可 ↓プレートに撒く

３７℃でインキュベーション（ふたを下にしてインキュベーションする）