Team:UT-Tokyo/Protocol
From 2010.igem.org
Protocol
前培養/トラフォメ(形質転換)
コロニーピックアップ・前培養
プラスミド精製(Miniprep・ミニプレ)
制限酵素処理(Xba1/Pst1)—同時にやるとき
制限酵素処理—ひとつずつやるとき
PCR(Pfu Ultra)
PCR(Ex- Taq)
PCR(KODplus)
コロニー PCR(Ex-Taq)
電気泳動
ゲルから切り出し・プラスミド精製
LB broth
アガロースゲル
シークエンス
コンピテントセルの作り方
例.
Transformation
preparation
-iGEM parts / ligation products
-LBbroth (No antibiotic) 500uL
・TE 15uL
・competent cells
・plates
・ice box
・heat block(42℃)
-Notice
competent cells
→ always onice!!! Melt on ice! Mix DNA as soon as cells melt!
-Protocol
iGEMパーツを解凍する場合 ↓P200のピペットマンにチップを付け、チップでフィルムに孔を空ける。 ↓add 15µl TE(MilliQで可)、ピペッティング ↓1µlをコンピテントセルにいれ30min on ice(コンピに対し1/5倍量以下になるように) ↓42℃45sec(終わったらon ice) ↓10分くらい待つ ↓エッペンにLBbroth300µl加える ↓37℃30min(ampなら省略可能) ※常温15minでも可 ↓プレートに撒く
37℃でインキュベーション
プレートはふたを下にしてインキュベーションする
8/6更新
Ligation products
↓ライゲーション産物10ulに対し、コンピテントセル50ulを混合
↓よく混ぜてonice30分
↓42℃45sec(終わったらon ice) ↓10分くらい待つ ↓エッペンにLBbroth300µl加える ↓37℃30min(ampなら省略可能) ※常温15minでも可 ↓プレートに撒く
37℃でインキュベーション(ふたを下にしてインキュベーションする)