ようやくSalmonella TyphimuriumのBACクローンが届いた

• BAC clones of S. Typhimurium, B_STM07H21 SGSC4024 1464540-1562427
  • ３型分泌装置をコードしている領域を含む
• BAC clones of S. Typhimurium, B_STM02P01　SGSC4014　837453-941863
  • 分泌シグナルをコードしている領域を含む

BAC cloneの培養

25 ug/mL Chloramphenicol培地の作製

• 25 ug/mL Chloramphenicolを含んだ寒天培地を25枚作製
• 25 ug/mL Chloramphenicol LB液体培地も２本作製

前培養

• 培地を作製している間，送られてきたそれぞれの菌をAgar stabからLB液体培地に移して約２時間前培養した

培養

• 前培養していたLBをそれぞれ２枚のプレートへ展開した
  • 片方は菌が薄くなるよう白金耳で展開し，もう片方には約300 uLを展開した
• 前培養していたLB約1.5 mLを25 ug/mL Chloramphenicol LB液体培地へ加えた

Electroporation用DNA solutionの精製

精製

木曜日に作った1 ng/uLのBAC solutionの塩濃度を下げるため，Microcon YM-10で精製した

• DNA solution 250 uLとDW450 uLをMicrocon YM-10のカラムに入れ，14,000rpm @4Cで１時間遠心した
• 新しいチューブにカラムを逆さにつけて，14,000rpm @4Cで１０分間遠心した
• 30 uL回収できたため，220 uLのDWを加え，元の濃度にした

エレポ

精製したDNA solution 1 uLを用いて，DH5aとMG1655のエレポを行った

• MG1655: 2.5 kV: 5.4 ms
• DH5a: 2.49 kV: 5.7 ms

SOB 200 uLを加えてラウンドチューブに移して浸透しながら2時間培養し，Ampicillin培地に展開した