Team:HokkaidoU Japan/Notebook/September23

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*DH5αとMG1655へのBac Vecterのelectroporetion
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== Bac Vecter Purification ==
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miniprepはQiagenのminiprep kit,qiaprepを用いて行った。
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1)昨日から培養してあったBac　Vector保有株を1.3ml,1.5mlエッペンチューブに移した。
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2)4C、15000rpmで1min遠心を行った。細胞塊が沈殿した。
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4)4C、15000rpmで1min遠心を行った。細胞塊が沈殿した。
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5)上澄みを捨て、4℃で保存していたBuffer P1を250　ul加え、voltexにかけた。細胞塊は見えなくなった。
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6)Buffer P2を250 ul加え、静かに数回転倒混和した。溶液の色が緑色に変化した。
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7)Buffer N3を350 ul加え、すぐに数回転倒混和した。溶液が白濁した。
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8)4C,13000rpmで10min遠心した。
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9)上澄みをピペットマンで専用のカラムに移し、4C,13000rpm,1min遠心した。
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10)下澄み液を捨て、500 ulのBuffer PBを加えて4C,13000rpm,1minで遠心を行った。
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11)下澄み液を捨て、さらに1min遠心した。
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12)新しい1.5 ml チューブにカラムを移し、TEを50 ul加えて1min放置した。
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13)4C,13000rpm,1min遠心を行った。
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14)-20Cで凍結保存した。

Revision as of 09:55, 23 September 2010

Notebook
  • Bac Vector の精製
  • AraC+RBS+pSB1A3のコロニーPCR
  • DH5αとMG1655へのBac Vecterのelectroporetion

Bac Vecter Purification

miniprepはQiagenのminiprep kit,qiaprepを用いて行った。

1)昨日から培養してあったBac　Vector保有株を1.3ml,1.5mlエッペンチューブに移した。

2)4C、15000rpmで1min遠心を行った。細胞塊が沈殿した。

3)上澄みを捨て、残りのサンプルをチューブに移した。

4)4C、15000rpmで1min遠心を行った。細胞塊が沈殿した。

5)上澄みを捨て、4℃で保存していたBuffer P1を250　ul加え、voltexにかけた。細胞塊は見えなくなった。

6)Buffer P2を250 ul加え、静かに数回転倒混和した。溶液の色が緑色に変化した。

7)Buffer N3を350 ul加え、すぐに数回転倒混和した。溶液が白濁した。

8)4C,13000rpmで10min遠心した。

9)上澄みをピペットマンで専用のカラムに移し、4C,13000rpm,1min遠心した。

10)下澄み液を捨て、500 ulのBuffer PBを加えて4C,13000rpm,1minで遠心を行った。

11)下澄み液を捨て、さらに1min遠心した。

12)新しい1.5 ml チューブにカラムを移し、TEを50 ul加えて1min放置した。

13)4C,13000rpm,1min遠心を行った。

14)-20Cで凍結保存した。
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