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Team:UT-Tokyo/Protocol
From 2010.igem.org
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| + | 前培養/トラフォメ（形質転換） | ||
| + | コロニーピックアップ・前培養 | ||
| + | プラスミド精製（Miniprep・ミニプレ） | ||
| + | 制限酵素処理（Xba1/Pst1）—同時にやるとき | ||
| + | 制限酵素処理—ひとつずつやるとき | ||
| + | PCR（Pfu Ultra） | ||
| + | PCR（Ex- Taq） | ||
| + | PCR（KODplus） | ||
| + | コロニー PCR（Ex-Taq） | ||
| + | 電気泳動 | ||
| + | ゲルから切り出し・プラスミド精製 | ||
| + | LB broth | ||
| + | アガロースゲル | ||
| + | シークエンス | ||
| + | コンピテントセルの作り方 | ||
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| + | 例． | ||
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=== Transformation === | === Transformation === | ||
Revision as of 15:10, 27 August 2010
Protocol
前培養/トラフォメ（形質転換） コロニーピックアップ・前培養 プラスミド精製（Miniprep・ミニプレ） 制限酵素処理（Xba1/Pst1）—同時にやるとき 制限酵素処理—ひとつずつやるとき PCR（Pfu Ultra） PCR（Ex- Taq） PCR（KODplus） コロニー PCR（Ex-Taq） 電気泳動 ゲルから切り出し・プラスミド精製 LB broth アガロースゲル シークエンス コンピテントセルの作り方
例．
Transformation
-preparation
・iGEM parts / ligation products
・LBbroth (No antibiotic) 500uL
・TE 15uL
・competent cells
・plates
・ice box
・heat block(42℃)
-Notice
competent cells
→ always onice!!! Melt on ice! Mix DNA as soon as cells melt!
-Protocol
iGEMパーツを解凍する場合 ↓P200のピペットマンにチップを付け、チップでフィルムに孔を空ける。 ↓add 15µl TE（MilliQで可）、ピペッティング ↓1µlをコンピテントセルにいれ30min on ice(コンピに対し1/5倍量以下になるように) ↓42℃45sec（終わったらon ice） ↓10分くらい待つ ↓エッペンにLBbroth300µl加える ↓37℃30min（ampなら省略可能） ※常温15minでも可 ↓プレートに撒く
３７℃でインキュベーション
プレートはふたを下にしてインキュベーションする
8/6更新
Ligation products
↓ライゲーション産物10ulに対し、コンピテントセル50ｕlを混合
↓よく混ぜてonice30分
↓42℃45sec（終わったらon ice） ↓10分くらい待つ ↓エッペンにLBbroth300µl加える ↓37℃30min（ampなら省略可能） ※常温15minでも可 ↓プレートに撒く
３７℃でインキュベーション（ふたを下にしてインキュベーションする）
