Team:LMU-Munich/Cut'N'survive/Schedule

Aim 1: DNA reproduction+PCR

PCR1: replication of the Tet-inducible CMV promotor PCR2a: replication of the TEVrecogn-NDegron-SF3 Part with mutagenisis (EcoR1 + Pst1) PCR2b: replication of the TEVrecogn-NDegron-SF3 Part with mutagenisis (EcoR1 + Pst1) PCR3: joining PCR of the TEVrecogn-NDegron-SF3 Part PCR4a: replication human bak with mutagenisis (Pst1) PCR4b: replication human bak with mutagenisis (Pst1) PCR5: joining PCR of human bak PCR6: replication of the SV40-polyadenylation site PCR7a: replication of the p14*TEVrecogn with mutagenisis (Spe1) PCR7b: replication of the p14*TEVrecogn with mutagenisis (Spe1) PCR8: joining PCR of p14*TEVrecogn

Aim 2: Assembling Biobricks

Aim 3: Testing products

Aim 4: Testing system

oder

Aim 1: DNA reproduction+PCR

Aim 2: Assembling Biobricks

Aim 3: Testing products

Aim 4: Testing system

alt:

Meilensteine

Für die Projekte haben wir uns jeweils folgende „Meilensteine“ gesetzt:

„TEV-System“

1. Verknüpfen von Bak mit interagierendem Protein A, einem N-Degron und einer Schnittstelle für die TEV-Protesase, sodass Bak noch aktiv bleibt. Davor ist ein induzierbarer Promotor und eine Antibiotikaresistenz geschaltet (Nachweis: induzierbarer Zelltod) Aufwand: ca. 6-8 Wochen, 2000€

2. Verknüpfen von eGFP als Zielgen mit einer TEV-Schnittstelle, einer TEV-Protease, und interagierendem Protein B. (Nachweis: eGFP leuchtet, Proteinchromatographie)

Aufwand: ca. 6-8 Wochen, 2000€, Parallele Arbeit ist möglich und notwendig

3. Einbringen beider Konstrukte in Zellen (Nachweis: eGFP leuchtet, einige Zellen sterben, Proteinchromatographie)

Aufwand: ca. 2 Wochen, 1000€

4. Parallel wird versucht, das erste Konstrukt stabil ins Zellgenom einzubauen.

Aufwand: ca. 2 Wochen, 500€