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Team:HokkaidoU Japan/Notebook/September27
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| + | =ようやく''Salmonella Typhimurium''のBACクローンが届いた= | ||
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| + | ** ３型分泌装置をコードしている領域を含む | ||
| + | * BAC clones of S. Typhimurium, B_STM02P01 SGSC4014 837453-941863 | ||
| + | ** 分泌シグナルをコードしている領域を含む | ||
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| + | ==BAC cloneの培養== | ||
| + | ===25 ug/mL Chloramphenicol培地の作製=== | ||
| + | * 25 ug/mL Chloramphenicolを含んだ寒天培地を25枚作製 | ||
| + | * 25 ug/mL Chloramphenicol LB液体培地も２本作製 | ||
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| + | ===前培養=== | ||
| + | * 培地を作製している間，送られてきたそれぞれの菌をAgar stabからLB液体培地に移して約２時間前培養した | ||
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| + | ===培養=== | ||
| + | * 前培養していたLBをそれぞれ２枚のプレートへ展開した | ||
| + | ** 片方は菌が薄くなるよう白金耳で展開し，もう片方には約300 uLを展開した | ||
| + | * 前培養していたLB約1.5 mLを25 ug/mL Chloramphenicol LB液体培地へ加えた | ||
| + | <!--** 今気づいたけど，これだと25 ug/mLが薄まってしまうね--> | ||
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| + | ==Electroporation用DNA solutionの精製== | ||
| + | ===精製=== | ||
| + | 木曜日に作った1 ng/uLのBAC solutionの塩濃度を下げるため，Microcon YM-10で精製した | ||
| + | * DNA solution 250 uLとDW450 uLをMicrocon YM-10のカラムに入れ，14,000rpm @4Cで１時間遠心した | ||
| + | * 新しいチューブにカラムを逆さにつけて，14,000rpm @4Cで１０分間遠心した | ||
| + | * 30 uL回収できたため，220 uLのDWを加え，元の濃度にした | ||
| + | ===エレポ=== | ||
| + | 精製したDNA solution 1 uLを用いて，DH5aとMG1655のエレポを行った | ||
| + | * MG1655: 2.5 kV: 5.4 ms | ||
| + | * DH5a: 2.49 kV: 5.7 ms | ||
| + | SOB 200 uLを加えてラウンドチューブに移して浸透しながら2時間培養し，Ampicillin培地に展開した | ||
Revision as of 14:39, 27 September 2010
since 13 Jul 2010
since 1 Aug 2010
ようやくSalmonella TyphimuriumのBACクローンが届いた
- BAC clones of S. Typhimurium, B_STM07H21 SGSC4024 1464540-1562427
- ３型分泌装置をコードしている領域を含む
- BAC clones of S. Typhimurium, B_STM02P01 SGSC4014 837453-941863
- 分泌シグナルをコードしている領域を含む
BAC cloneの培養
25 ug/mL Chloramphenicol培地の作製
- 25 ug/mL Chloramphenicolを含んだ寒天培地を25枚作製
- 25 ug/mL Chloramphenicol LB液体培地も２本作製
前培養
- 培地を作製している間，送られてきたそれぞれの菌をAgar stabからLB液体培地に移して約２時間前培養した
培養
- 前培養していたLBをそれぞれ２枚のプレートへ展開した
- 片方は菌が薄くなるよう白金耳で展開し，もう片方には約300 uLを展開した
- 前培養していたLB約1.5 mLを25 ug/mL Chloramphenicol LB液体培地へ加えた
Electroporation用DNA solutionの精製
精製
木曜日に作った1 ng/uLのBAC solutionの塩濃度を下げるため，Microcon YM-10で精製した
- DNA solution 250 uLとDW450 uLをMicrocon YM-10のカラムに入れ，14,000rpm @4Cで１時間遠心した
- 新しいチューブにカラムを逆さにつけて，14,000rpm @4Cで１０分間遠心した
- 30 uL回収できたため，220 uLのDWを加え，元の濃度にした
エレポ
精製したDNA solution 1 uLを用いて，DH5aとMG1655のエレポを行った
- MG1655: 2.5 kV: 5.4 ms
- DH5a: 2.49 kV: 5.7 ms
