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	== September 27 ==		== September 27 ==
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	<div align="right"><span style="font-size:10pt;">[[#notebook|>>top]]</span></div>		<div align="right"><span style="font-size:10pt;">[[#notebook|>>top]]</span></div>
		+	'''Time'''
		+	:9：00～
		+
		+	'''Member'''
		+	:岩城、福山、古道、臼井、革島、中村、吉村
		+	:Iwaki,Fukuyama,Furumichi,Usui,Kawashima,Nakamura,Yoshimura
		+
		+	'''Purpose'''
		+	:(1)　前日培養しておいた、dps＋GFP, ahpC+GFP, AcrAB+GFP, pSB1C3のミニプレップ　[古道]
		+	:(2)　(1)でミニプレップ処理をしたdps＋GFP, ahpC+GFP, AcrAB+GFPの制限酵素処理　[古道]
		+	:(3)　9月26日の(3)の続き　―　pSB1C3のゲル抽出後の吸光度測定　[福山]
		+	:(4)　acrAB,ahpC,dps,oxyR,sodA,sufA,yaiA(いずれもon GFP+pSB6A1),pSB1C3のゲル抽出　[福山]
		+	:(5)　ベクターpSB1C3,インサートSufA+GFP,OxyR,SodA,yaiAのライゲーションとトランスフォーメーション　[福山]
		+	:(6)　TetR,K121013の蛍光強度測定　[臼井、中村]
		+
		+	'''Method'''
		+	:(1)　前日培養しておいた、dps＋GFP, ahpC+GFP, AcrAB+GFP, pSB1C3のミニプレップ
		+	::　1.5mlエッペンチューブに集菌
		+	::　↓SolutionⅠを100µl加えボルテックスし常温で5分放置
		+	::　↓SolutionⅡを200µl加え混ぜ氷上に5分放置(これ以降はボルテックスをしない)
		+	::　↓SolutiionⅢを150µl加え混ぜ氷上に5分放置
		+	::　↓cfg　4℃、15,000rpm、5分
		+	::　↓上清を回収しそれに100％エタノールを1ml加え混ぜた
		+	::　↓常温10分放置
		+	::　↓cfg　4℃、15,000rpm、12分
		+	::　↓上清を捨て沈殿に70％エタノールを500μl加えた
		+	::　↓cfg　4℃、15,000rpm、3分
		+	::　↓エタノールを除き2分遠心乾燥させた
		+	::　↓RNase入りTEを30µl加え溶解した
		+	::　↓各吸光度を測定した
		+
		+	:(2)　(1)でミニプレップ処理をしたdps＋GFP, ahpC+GFP, AcrAB+GFPの制限酵素処理
		+	::　以下の組成に従い制限酵素処理を行った
		+	::　↓37℃、一晩、インキュベートした
		+	::<TABLE BORDER="1"><TR>
		+	::<TD COLSPAN="">表1: 制限酵素処理</TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD></TD><TD>dps</TD><TD>AcrAB</TD><TD>ahpC</TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD>DNA</TD><TD>20μl</TD><TD>20μl</TD><TD>15µl</TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD>Buffer　H</TD><TD>5µl</TD><TD>5µl</TD><TD>5µl</TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD>H<SUB>2</SUB>O</TD><TD>23µl</TD><TD>23µl</TD><TD>28μl</TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD>''Xba''Ⅰ</TD><TD>1µl</TD><TD>1µl</TD><TD>1µl</TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD>''Pst''Ⅰ</TD><TD>1µl</TD><TD>1µl</TD><TD>1µl</TD></TR>
		+	::</TABLE>
		+
		+	:(3)　pSB1C3のゲル抽出後の吸光度測定
		+	::　9月26日の(3)で得たpSB1C3の7試料(各試料の全量11 μl)をそれぞれ1 μlとって100倍希釈で吸光度測定を行った
		+
		+	:(4)　acrAB,ahpC,dps,oxyR,sodA,sufA,yaiA(いずれもon GFP+pSB6A1),pSB1C3のゲル抽出
		+	::　acrAB,ahpC,dps,oxyR,sodA,sufA,yaiA(いずれもon GFP+pSB6A1),pSB1C3それぞれに5倍希釈で
		+	::　Loading Bufferを加えた
		+	::　↓それぞれを低融点アガロース1%ゲルにアプライし、50Vで1時間電気泳動した
		+	::　↓UVを照射してバンドを確認できたので、ゲルを切り出した
		+	::　↓各バンドの試料につき400 μlずつMilliQを加えた
		+	::　↓フェノールを430 μlほど加えた
		+	::　↓遠心（13,000 rpm、5分間、25℃）
		+	::　↓上清を回収
		+	::　↓フェノールクロロフォルムをエッペンチューブの8割ほど加え、vortex
		+	::　↓遠心（13,000 rpm、5分間、25℃）
		+	::　↓上清を回収
		+	::　↓酢酸ナトリウムを50 μlずつ、イソプロパノールを800 μlずつ加えた
		+	::　↓遠心（14,500 rpm,30分間,4℃）
		+	::　↓上清を捨て、70％エタノールを500 μlずつ加えた
		+	::　↓遠心（14,500 rpm,30分間,4℃）
		+	::　↓上清を捨て、乾燥させた
		+	::　↓pSB1C3(*1)にTEを10 μl加えて溶かし、この溶液をSufAにいれて溶かした→溶液(*2)
		+	::　OxyRにTEを10 μl加えて溶かし、この溶液をpSB1C3(*2)にいれて溶かした→溶液(*3)
		+
		+
		+	:(5)　下表1の通りに溶液を調整した
		+	::　↓16℃で30分間インキュベートした
		+	::　↓各試料にDH5α懸濁液150 μlずつ加えた
		+	::　↓氷上で3分放置
		+	::　↓43℃下に30秒置いた
		+	::　↓soc培地を900 μlずつ加えた
		+	::　↓集菌してクロラムフェニコール入りのLB寒天培地にまいた
		+	::　↓37℃,overnightでインキュベート
		+	::<TABLE BORDER="1"><TR>
		+	::<TD COLSPAN="6">表2: 試薬組成(単位は μl)</TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD></TD><TD>試料1</TD><TD>試料2</TD><TD>試料3</TD><TD>試料4</TD><TD>試料5</TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD>pSB1C3</TD><TD>(*2)全量</TD><TD>(*3)全量</TD><TD>0.5</TD><TD>2</TD><TD>1</TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD>Suf+GFP</TD><TD>(*2)全量</TD><TD>0</TD><TD></TD><TD></TD><TD></TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD>OxyR</TD><TD></TD><TD>(*3)全量</TD><TD>3.9</TD><TD></TD><TD></TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD>yaiA</TD><TD></TD><TD></TD><TD></TD><TD>5.6</TD><TD></TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD>SodA</TD><TD></TD><TD></TD><TD></TD><TD></TD><TD>9</TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD>MilliQ</TD><TD></TD><TD></TD><TD>5.6</TD><TD>2.4</TD><TD></TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD>2xLigation Mix</TD><TD>10</TD><TD>10</TD><TD>10</TD><TD>10</TD><TD>10</TD></TR>
		+	::<TR>
		+	::<TD>全量</TD><TD>20</TD><TD>20</TD><TD>20</TD><TD>20</TD><TD>20</TD></TR>
		+	::</TABLE>
		+
		+	:(6)　TetR,K121013の蛍光強度測定
		+	::　菌液濁度(O.D.<SUB>600</SUB>)を0.4~0.6に調整した
		+	::　↓終濃度がlessおよび1nM～1mM(10倍刻み)になるように、菌液に過酸化水素を付加した
		+	::　↓37℃でインキュベート
		+	::　　※10分ごとに菌液500μLずつ回収した
		+	::　↓cfg.4℃ 14,000rpm 1min
		+	::　↓上清を除いた
		+	::　↓1xPBS 100μLでペレットを溶解した
		+	::　↓全量を蛍光強度測定に用いた
		+
		+	::　※この操作を90分まで行った
		+
		+	'''Results'''
		+	:(1)
		+	:<TABLE BORDER="1"><TR>
		+	:<TD COLSPAN="4">表3: 吸光度結果</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>1/100</TD><TD>dps</TD><TD>AcrAB</TD><TD>ahpC</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>1回目</TD><TD>1.242</TD><TD>1.570</TD><TD>2.616</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>2回目</TD><TD>1.173</TD><TD>1.595</TD><TD>2.538</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>3回目</TD><TD>1.167</TD><TD>1.516</TD><TD>2.531</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>4回目</TD><TD>1.168</TD><TD>1.389</TD><TD>2.533</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>5回目</TD><TD>1.169</TD><TD>1.394</TD><TD>2.512</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>平均 </TD><TD>1.1838</TD><TD>1.4928</TD><TD>2.546</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>濃度</TD><TD>5919(ng/µl)</TD><TD>7464(ng /µl)</TD><TD>12730(ng/µｌ)</TD></TR>
		+	:</TABLE>
		+
		+	:(2)次回に正しくcutされているのかを電気泳動で確認する
		+	:(3)吸光度測定(260nm)の結果を表4に示した。
		+	::但し、試料8は１回測定した後、間違えて希釈した試料を捨ててしまった
		+	::また、前日の実験(3)では7つの試料であったが、
		+	::切り出したゲルを10個のエッペンに分けて入れたので、今回は試料数が10になっている
		+	:<TABLE BORDER="1"><TR>
		+	:<TD COLSPAN="11">表4: 吸光度(1/100)</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD></TD><TD>試料1</TD><TD>試料2</TD><TD>試料3</TD><TD>試料4</TD><TD>試料5</TD><TD>試料6</TD><TD>試料7</TD><TD>試料8</TD><TD>試料9</TD><TD>試料10</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>1回目</TD><TD>0.024</TD><TD>0.017</TD><TD>0.009</TD><TD>0.054</TD><TD>0</TD><TD>0.059</TD><TD>0.081</TD><TD>0.006</TD><TD>0.016</TD><TD>0.015</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>2回目</TD><TD>0.017</TD><TD>0.021</TD><TD>0.011</TD><TD>0.056</TD><TD>0.003</TD><TD>0.067</TD><TD>0.086</TD><TD></TD><TD>0.013</TD><TD>0.007</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>3回目</TD><TD>0.017</TD><TD>0.013</TD><TD>0.012</TD><TD>0.054</TD><TD>0.006</TD><TD>0.06</TD><TD>0.078</TD><TD></TD><TD>0.015</TD><TD>0.012</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>4回目</TD><TD>0.017</TD><TD>0.018</TD><TD>0.013</TD><TD>0.061</TD><TD>0.004</TD><TD>0.061</TD><TD>0.078</TD><TD></TD><TD>0.015</TD><TD>0.009</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>5回目</TD><TD>0.018</TD><TD>0.014</TD><TD>0.014</TD><TD>0.06</TD><TD>0</TD><TD>0.063</TD><TD>0.083</TD><TD></TD><TD>0.019</TD><TD>0.008</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>平均</TD><TD>0.019</TD><TD>0.0166</TD><TD>0.0118</TD><TD>0.057</TD><TD>0.0026</TD><TD>0.062</TD><TD>0.0812</TD><TD>0.006</TD><TD>0.0156</TD><TD>0.0102</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>濃度(ng/μl)</TD><TD>93</TD><TD>83</TD><TD>59</TD><TD>285</TD><TD>13</TD><TD>310</TD><TD>406</TD><TD>30</TD><TD>78</TD><TD>51</TD></TR>
		+	:</TABLE>
		+
		+	:(4)　acrAB,ahpC,dps,oxyR,sodAを電気泳動したゲルを粉砕してしまったので、DNAのゲル抽出はできなかった
		+	::sufA,yaiA,pSB1C3に関してはDNAのゲル抽出ができた
		+	::吸光度測定(260nm)の結果を表に示した
		+	:<TABLE BORDER="1"><TR>
		+	:<TD COLSPAN="4">表5: 吸光度測定結果(1/100)</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD></TD><TD>SufA</TD><TD>pSB1C3<BR>(''Eco''RⅠと''Pst''Ⅰでcut)</TD><TD>yaiA</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>1回目</TD><TD>0.041</TD><TD>0.034</TD><TD>0.07</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>2回目</TD><TD>0.039</TD><TD>0.033</TD><TD>0.069</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>3回目</TD><TD>0.04</TD><TD>0.034</TD><TD>0.068</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>平均</TD><TD>0.04</TD><TD>0.0344</TD><TD>0.069</TD></TR>
		+	:<TR>
		+	:<TD>濃度(ng/μl)</TD><TD>200</TD><TD>172</TD><TD>345</TD></TR>
		+	:</TABLE>
		+
		+	:(5)　明日、コロニーができているかを確認する
		+	:(6)　29日実験ノートに添付
		+
		+	'''Consideration'''
		+	:(3)　100倍希釈で吸光度が0.010より小さい値を示した試料5と試料8はとても薄く、
		+	::誤差の範囲(ゼロ補正に使ったMilliQでも出うる値)なので、使い物にはならないと思われる
		+	:(4)　低融点アガロースゲルは非常にもろく壊れやすいので、持ち運びに細心の注意が必要
	== September 28 ==		== September 28 ==

---

Revision as of 08:52, 23 October 2010

Contents 1 September 26 2 September 27 3 September 28 4 September 29 5 September 30 6 October 1 7 October 2

September 26

Time

9：00～

Member

福山,臼井,革島,中村

Fkuyama,Usui,Kawashima,Nakamura

Purpose

(1)　promoter less RFP、pSB1C3のミニプレ→制限酵素処理　[革島]

(2)　各プロモーター入GFP on pSB6A1の制限酵素処理　[中村]

(3)　pSB1C3のゲル抽出　[福山]

(4)　ahpC,sufAの蛍光強度測定実験　[臼井]

Method

(1)　promoter less RFP、pSB1C3のミニプレ→制限酵素処理

　＊ミニプレ

　　　9/15カラム不使用のミニプレ参照

　　　最後はRNase 20ng/μL入りMilliQ(50倍希釈) 30μLに溶かした

　＊制限酵素処理

　　　pSB1C3：DNA濃度10万ng分をEcoRⅠ、pstⅠ1μL用い、Total　25μLで処理した(8本)

　　　promoter less RFP：DNA濃度10万ng分をEcoRⅠ、XbaⅠ1μL用い、Total　25μLで処理した(3本)

(2)　各プロモーター入GFP on pSB6A1の制限酵素処理

　各プロモーター(acrAB、ahpC、dps、oxyR、sodA、sufA、yaiA)

　の入ったpSB6A1をE-Pcutした(Overnight)

</TR>

表1: 制限酵素処理試薬組成
	acrAB	ahpC	dps	oxyR	sodA	sufA	yaiA
DNAsol	8.8μL	5.5μL	8.56μL	7.1μL	6.96μL	8.7μL	6.2μL
EcoRⅠ	1μL
PstⅠ	1μL
10xH	2.5μL
Milli Q	Final　25μLに調整

(3)　pSB1C3のゲル抽出

　4種類の濃度（3589.8ng/μlが1試料,2393.2ng/μlが3試料,1196.6ng/μlが2試料,598.3ng/μlが1試料）

　pSB1C3計7試料(全量はそれぞれ50 μl)に3 μlずつCIAPを加えた

　↓前日に作成した1％青ゲルを使って100Vで25分間電気泳動した

　　確認のため、同時に各試料5 μlずつとって1％アガロースゲルを使って135Vで15分間電気泳動した

　↓確認のための電気泳動でバンドが確認できたので、バンドが見えなかった青ゲルをさらにEtBrで20分間染色した

　↓UVを照射してバンドを確認できたので、ゲルを切り出した

　↓各バンドの試料につき400 μlずつMilliQを加えた

　↓フェノールを430 μlほど加えた

　↓遠心（13,000 rpm、5分間、25℃）

　↓上清を回収

　↓フェノールクロロフォルムをエッペンチューブの8割ほど加え、vortex

　↓遠心（13,000 rpm、5分間、25℃）

　↓上清を回収

　↓酢酸ナトリウムを50 μlずつ、イソプロパノールを800 μlずつ加えた

　↓遠心（14,500 rpm,30分間,4℃）

　↓上清を捨て、70％エタノールを500 μlずつ加えた

　↓遠心（14,500 rpm,30分間,4℃）

　↓上清を捨て、乾燥させた

　↓TEを11 μlずつ加えた

　↓冷凍庫で保存

(4)　ahpC,sufAの蛍光強度測定実験

　菌液濁度(O.D.₆₀₀)を0.4~0.6に調整した

　↓終濃度がlessおよび1nM～1mM(10倍刻み)になるように、菌液に過酸化水素を付加した

　↓37℃でインキュベートし、10分ごとに菌液500μLずつ回収した

　↓cfg.4℃ 14,000rpm,1min

　↓上清を除いた

　↓1xPBS 100μLでペレットを溶解した

　↓全量を蛍光強度測定に用いた

　　※この操作を80分まで行った

Results

(1)

表2: 濁度測定
	RFP 1	RFP 2	RFP 3	RFP 4	RFP 5	RFP 6	RFP 7	pSB1C3
OD260	0.753	0.589	0.756	0.505	0.503	0.517	0.456	0.570
DNA濃度	18825	14725	18825	12625	12591	12925	11400	14250
全量	28	29	29	29	29	29	29	29

(2)明日、ゲル抽予定

(3)吸光度をまだ測っていないので、ゲル抽出が上手くいったのかはわからない

Consideration

(1)　問題なく実験はうまくいった

(3)　今までも、青ゲルを使った抽出のための電気泳動で、バンドが見えないことがあったようだが、

今回のように EtBr染色し、UVにあてるとバンドの存在が確認できるケースも結構あったのかもしれない。

(4)　29日の実験ノートに結果を添付

September 27

Time

9：00～

Member

岩城、福山、古道、臼井、革島、中村、吉村

Iwaki,Fukuyama,Furumichi,Usui,Kawashima,Nakamura,Yoshimura

Purpose

(1)　前日培養しておいた、dps＋GFP, ahpC+GFP, AcrAB+GFP, pSB1C3のミニプレップ　[古道]

(2)　(1)でミニプレップ処理をしたdps＋GFP, ahpC+GFP, AcrAB+GFPの制限酵素処理　[古道]

(3)　9月26日の(3)の続き　―　pSB1C3のゲル抽出後の吸光度測定　[福山]

(4)　acrAB,ahpC,dps,oxyR,sodA,sufA,yaiA(いずれもon GFP+pSB6A1),pSB1C3のゲル抽出　[福山]

(5)　ベクターpSB1C3,インサートSufA+GFP,OxyR,SodA,yaiAのライゲーションとトランスフォーメーション　[福山]

(6)　TetR,K121013の蛍光強度測定　[臼井、中村]

Method

(1)　前日培養しておいた、dps＋GFP, ahpC+GFP, AcrAB+GFP, pSB1C3のミニプレップ

　1.5mlエッペンチューブに集菌

　↓SolutionⅠを100µl加えボルテックスし常温で5分放置

　↓SolutionⅡを200µl加え混ぜ氷上に5分放置(これ以降はボルテックスをしない)

　↓SolutiionⅢを150µl加え混ぜ氷上に5分放置

　↓cfg　4℃、15,000rpm、5分

　↓上清を回収しそれに100％エタノールを1ml加え混ぜた

　↓常温10分放置

　↓cfg　4℃、15,000rpm、12分

　↓上清を捨て沈殿に70％エタノールを500μl加えた

　↓cfg　4℃、15,000rpm、3分

　↓エタノールを除き2分遠心乾燥させた

　↓RNase入りTEを30µl加え溶解した

　↓各吸光度を測定した

(2)　(1)でミニプレップ処理をしたdps＋GFP, ahpC+GFP, AcrAB+GFPの制限酵素処理

　以下の組成に従い制限酵素処理を行った

　↓37℃、一晩、インキュベートした

表1: 制限酵素処理
	dps	AcrAB	ahpC
DNA	20μl	20μl	15µl
Buffer　H	5µl	5µl	5µl
H2O	23µl	23µl	28μl
XbaⅠ	1µl	1µl	1µl
PstⅠ	1µl	1µl	1µl

(3)　pSB1C3のゲル抽出後の吸光度測定

　9月26日の(3)で得たpSB1C3の7試料(各試料の全量11 μl)をそれぞれ1 μlとって100倍希釈で吸光度測定を行った

(4)　acrAB,ahpC,dps,oxyR,sodA,sufA,yaiA(いずれもon GFP+pSB6A1),pSB1C3のゲル抽出

　acrAB,ahpC,dps,oxyR,sodA,sufA,yaiA(いずれもon GFP+pSB6A1),pSB1C3それぞれに5倍希釈で

　Loading Bufferを加えた

　↓それぞれを低融点アガロース1%ゲルにアプライし、50Vで1時間電気泳動した

　↓UVを照射してバンドを確認できたので、ゲルを切り出した

　↓各バンドの試料につき400 μlずつMilliQを加えた

　↓フェノールを430 μlほど加えた

　↓遠心（13,000 rpm、5分間、25℃）

　↓上清を回収

　↓フェノールクロロフォルムをエッペンチューブの8割ほど加え、vortex

　↓遠心（13,000 rpm、5分間、25℃）

　↓上清を回収

　↓酢酸ナトリウムを50 μlずつ、イソプロパノールを800 μlずつ加えた

　↓遠心（14,500 rpm,30分間,4℃）

　↓上清を捨て、70％エタノールを500 μlずつ加えた

　↓遠心（14,500 rpm,30分間,4℃）

　↓上清を捨て、乾燥させた

　↓pSB1C3(*1)にTEを10 μl加えて溶かし、この溶液をSufAにいれて溶かした→溶液(*2)

　OxyRにTEを10 μl加えて溶かし、この溶液をpSB1C3(*2)にいれて溶かした→溶液(*3)

(5)　下表1の通りに溶液を調整した

　↓16℃で30分間インキュベートした

　↓各試料にDH5α懸濁液150 μlずつ加えた

　↓氷上で3分放置

　↓43℃下に30秒置いた

　↓soc培地を900 μlずつ加えた

　↓集菌してクロラムフェニコール入りのLB寒天培地にまいた

　↓37℃,overnightでインキュベート

表2: 試薬組成(単位は μl)
	試料1	試料2	試料3	試料4	試料5
pSB1C3	(*2)全量	(*3)全量	0.5	2	1
Suf+GFP	(*2)全量	0
OxyR		(*3)全量	3.9
yaiA				5.6
SodA					9
MilliQ			5.6	2.4
2xLigation Mix	10	10	10	10	10
全量	20	20	20	20	20

(6)　TetR,K121013の蛍光強度測定

　菌液濁度(O.D.₆₀₀)を0.4~0.6に調整した

　↓終濃度がlessおよび1nM～1mM(10倍刻み)になるように、菌液に過酸化水素を付加した

　↓37℃でインキュベート

　　※10分ごとに菌液500μLずつ回収した

　↓cfg.4℃ 14,000rpm 1min

　↓上清を除いた

　↓1xPBS 100μLでペレットを溶解した

　↓全量を蛍光強度測定に用いた

　※この操作を90分まで行った

Results

(1)

表3: 吸光度結果
1/100	dps	AcrAB	ahpC
1回目	1.242	1.570	2.616
2回目	1.173	1.595	2.538
3回目	1.167	1.516	2.531
4回目	1.168	1.389	2.533
5回目	1.169	1.394	2.512
平均	1.1838	1.4928	2.546
濃度	5919(ng/µl)	7464(ng /µl)	12730(ng/µｌ)

(2)次回に正しくcutされているのかを電気泳動で確認する

(3)吸光度測定(260nm)の結果を表4に示した。

但し、試料8は１回測定した後、間違えて希釈した試料を捨ててしまった

また、前日の実験(3)では7つの試料であったが、

切り出したゲルを10個のエッペンに分けて入れたので、今回は試料数が10になっている

表4: 吸光度(1/100)
	試料1	試料2	試料3	試料4	試料5	試料6	試料7	試料8	試料9	試料10
1回目	0.024	0.017	0.009	0.054	0	0.059	0.081	0.006	0.016	0.015
2回目	0.017	0.021	0.011	0.056	0.003	0.067	0.086		0.013	0.007
3回目	0.017	0.013	0.012	0.054	0.006	0.06	0.078		0.015	0.012
4回目	0.017	0.018	0.013	0.061	0.004	0.061	0.078		0.015	0.009
5回目	0.018	0.014	0.014	0.06	0	0.063	0.083		0.019	0.008
平均	0.019	0.0166	0.0118	0.057	0.0026	0.062	0.0812	0.006	0.0156	0.0102
濃度(ng/μl)	93	83	59	285	13	310	406	30	78	51

(4)　acrAB,ahpC,dps,oxyR,sodAを電気泳動したゲルを粉砕してしまったので、DNAのゲル抽出はできなかった

sufA,yaiA,pSB1C3に関してはDNAのゲル抽出ができた

吸光度測定(260nm)の結果を表に示した

表5: 吸光度測定結果(1/100)
	SufA	pSB1C3 (EcoRⅠとPstⅠでcut)	yaiA
1回目	0.041	0.034	0.07
2回目	0.039	0.033	0.069
3回目	0.04	0.034	0.068
平均	0.04	0.0344	0.069
濃度(ng/μl)	200	172	345

(5)　明日、コロニーができているかを確認する

(6)　29日実験ノートに添付

Consideration

(3)　100倍希釈で吸光度が0.010より小さい値を示した試料5と試料8はとても薄く、

誤差の範囲(ゼロ補正に使ったMilliQでも出うる値)なので、使い物にはならないと思われる

(4)　低融点アガロースゲルは非常にもろく壊れやすいので、持ち運びに細心の注意が必要

September 28

September 29

September 30

October 1

October 2