Template:KIT-Kyoto-September1

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【時間】
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:9:00～
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:古道
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:岩城、古道
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:Iwaki,Furumichi
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【実験目的】
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:(1)　pSB1A2(BBa_E0420:CFP)、pSB1A2(BBa_E0430:YFP)、
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:# DNA miniprep of pSB1A2(E0420),pSB1A2(E0430),pSB1A2(I13507) and pSB6A1(K121013).[Furumichi]
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::pSB1A2(BBa_I13507:RFP)、pSB6A1(BBa_K121013)のアルカリミニプレップ、DNA濃度測定
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:# Digestion pSB1A2(E0420),pSB1A2(E0430),pSB1A2(I13507) and pSB6A1(K121013) of  by restriction enzymes.[Furumichi]
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:(1)　pSB1A2(E0420)、pSB1A2(E0430)、
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::pSB1A2(I13507)、pSB6A1(K121013)のアルカリミニプレップ、DNA濃度測定　[古道]
:(2)　アルカリミニプレップ済の
:(2)　アルカリミニプレップ済の
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::pSB1A2(BBa_E0420:CFP)9/1付け、pSB1A2(BBa_E0430:YFP)9/1付け、
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::pSB1A2(E0420)9/1付け、pSB1A2(E0430)9/1付け、
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::pSB1A2(BBa_I13507:RFP)9/1付け、pSB6A1(BBa_K121013)の制限酵素処理
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::pSB1A2(I13507)9/1付け、pSB6A1(K121013)の制限酵素処理　[古道]
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【実験内容】
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'''Method'''
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:(1)　pSB1A2(BBa_E0420:CFP)、pSB1A2(BBa_E0430:YFP)、
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:(1)　pSB1A2(E0420)、pSB1A2(E0430)、
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::pSB1A2(BBa_I13507:RFP)、pSB6A1(BBa_K121013)のアルカリミニプレップ、DNA濃度測定
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::pSB1A2(I13507)、pSB6A1(K121013)のアルカリミニプレップ、DNA濃度測定
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::　培養済のpSB1A2(BBa_E0420:CFP)、pSB1A2(BBa_E0430:YFP)、
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::　培養済のpSB1A2(E0420)、pSB1A2(E0430)、
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::　pSB1A2(BBa_I13507:RFP)、pSB6A1(BBa_K121013)を1.5mlエッペンに集菌した
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::　pSB1A2(I13507)、pSB6A1(K121013)を1.5mlエッペンに集菌した
::　↓菌体を氷令したSoltionⅠ100µlに懸濁しvortexした
::　↓菌体を氷令したSoltionⅠ100µlに懸濁しvortexした
::　↓SoltionⅡ200µl加え混合し氷上に5分放置した
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::　↓吸光度測定をした
::　↓吸光度測定をした
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::　↓8/31にアルカリミニプレップ処理をしたpSB1A2(BBa_E0420:CFP)、
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::　　pSB1A2(BBa_E0430:YFP)、pSB1A2(BBa_I13507:RFP)も吸光度測定を行った
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::　　pSB1A2(E0430)、pSB1A2(I13507)も吸光度測定を行った
:(2)　アルカリミニプレップ済の
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::pSB1A2(BBa_E0420:CFP)9/1付け、pSB1A2(BBa_E0430:YFP)9/1付け、
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::pSB1A2(BBa_I13507:RFP)9/1付け、pSB6A1(BBa_K121013)の制限酵素処理
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::pSB1A2(I13507)9/1付け、pSB6A1(K121013)の制限酵素処理
::　下の組成の通りに1.5mlエッペンに分注した
::　下の組成の通りに1.5mlエッペンに分注した
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::<TD>H buffer</TD><TD>10µl</TD><TD>10µl</TD><TD>15µl</TD><TD>15µl</TD></TR>
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【実験結果】
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'''Results'''
:(1)　吸光度測定結果
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:(2)　一晩、制限酵素処理した後、DNA抽出を行う
:(2)　一晩、制限酵素処理した後、DNA抽出を行う

Latest revision as of 11:54, 25 October 2010

September 1

>>top

Time

9:00～

Member

岩城、古道
Iwaki,Furumichi

Purpose

  1. DNA miniprep of pSB1A2(E0420),pSB1A2(E0430),pSB1A2(I13507) and pSB6A1(K121013).[Furumichi]
  2. Digestion pSB1A2(E0420),pSB1A2(E0430),pSB1A2(I13507) and pSB6A1(K121013) of by restriction enzymes.[Furumichi]
(1)　pSB1A2(E0420)、pSB1A2(E0430)、
pSB1A2(I13507)、pSB6A1(K121013)のアルカリミニプレップ、DNA濃度測定　[古道]
(2)　アルカリミニプレップ済の
pSB1A2(E0420)9/1付け、pSB1A2(E0430)9/1付け、
pSB1A2(I13507)9/1付け、pSB6A1(K121013)の制限酵素処理　[古道]

Method

(1)　pSB1A2(E0420)、pSB1A2(E0430)、
pSB1A2(I13507)、pSB6A1(K121013)のアルカリミニプレップ、DNA濃度測定
　培養済のpSB1A2(E0420)、pSB1A2(E0430)、
　pSB1A2(I13507)、pSB6A1(K121013)を1.5mlエッペンに集菌した
　↓菌体を氷令したSoltionⅠ100µlに懸濁しvortexした
　↓SoltionⅡ200µl加え混合し氷上に5分放置した
　↓SoltionⅢ150µl加え混合し氷上に5分放置した
　↓4℃、14,000rpmで10分間遠心した
　↓上清を回収しφOH/CIAAを200µl加え14000rpmで5分間遠心した
　↓上清を回収しCIAA を200µl加え14000rpmで5分間遠心した
　↓上清を回収し400µlのイソプロパノールを加え混ぜた
　↓4℃、14,000rpmで20分間遠心した
　↓上澄みを捨て70％エタノールを200µl加えvortexした
　↓4℃、14,000rpmで10分間遠心した
　↓上澄みを捨てて5分間、37℃インキュベートで乾燥させた
　↓RNase入りTE(10µg/ml)30µlを加え37℃で30分間インキュベートした
　↓吸光度測定をした
　↓8/31にアルカリミニプレップ処理をしたpSB1A2(E0420)、
　　pSB1A2(E0430)、pSB1A2(I13507)も吸光度測定を行った
(2)　アルカリミニプレップ済の
pSB1A2(E0420)9/1付け、pSB1A2(E0430)9/1付け、
pSB1A2(I13507)9/1付け、pSB6A1(K121013)の制限酵素処理
　下の組成の通りに1.5mlエッペンに分注した
pSB6A1
(BBa_K121013)		pSB1A2
(BBa_E0420:CFP)		pSB1A2
(BBa_I13507:RFP)		pSB1A2
(BBa_E0430:YFP)
DNA80µl70µl110µl90µl
H2O9.4µl19.4µl24.4µl44.4µl
H buffer10µl10µl15µl15µl
EcoRⅠ0.3µl0.3µl0.3µl0.3µl
PstⅠ0.3µl0.3µl0.3µl0.3µl
total100µl100µl150µl150µl
　↓37℃で一晩インキュベートした


Results

(1)　吸光度測定結果
8/31付け
pSB1A2(E0420)
(100倍希釈)
1.176
1.120
1.104
1.089
1.088
平均1.1154
濃度：5.58×103(µg/ml)
8/31付け
pSB1A2(BBa_E0430:YFP)
(100倍希釈)
1.322
1.310
1.309
1.292
1.286
平均1.3038
濃度：6.51×103(µg/ml)
8/31付け
pSB1A2(I13507)
(100倍希釈)
1.134
1.114
1.110
1.102
1.104
平均1.1128
濃度：5.56×103(µg/ml)
9/1付け
pSB1A2(BBa_E0420:CFP)
(100倍希釈)
1.318
1.309
1.316
1.320
1.327
平均1.318
濃度：6.59×103(µg/ml)
9/1付け
pSB1A2(E0430)
(100倍希釈)
1.567
1.538
1.528
1.516
1.490
平均1.5278
濃度：7.64×103(µg/ml)
9/1付け
pSB1A2(I13507)
(100倍希釈)
1.193
1.169
1.196
1.188
1.189
平均1.187
濃度：5.935×103(µg/ml)

pSB6A1(K121013)
(100倍希釈)
1.193
1.390
1.378
1.362
1.336
平均1.3712
濃度：6.91×103(µg/ml)
(2)　一晩、制限酵素処理した後、DNA抽出を行う
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