Team:HokkaidoU Japan/Notebook/October3

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* コントロールの16番以外，それらしいバンドがある
* コントロールの16番以外，それらしいバンドがある
* 2 ug/uLくらいのDNA量と推定
* 2 ug/uLくらいのDNA量と推定
 +
<div style="clear:both;"></div>
==Insertの確認==
==Insertの確認==
[[Image:HokkaidoU Japan 20101003b.JPG|200px|right|thumb]]
[[Image:HokkaidoU Japan 20101003b.JPG|200px|right|thumb]]
Miniprepで得たプラスミドをNot Iで処理すれば，約1800 bpのInsertが得られるはずである
Miniprepで得たプラスミドをNot Iで処理すれば，約1800 bpのInsertが得られるはずである
-
{|class="protocol" style="text-align:center;"
+
{|border="1px" class="protocol" style="text-align:center;"
!well
!well
!DNA
!DNA
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|-
|-
|3
|3
-
|No.8
+
|rowspan="3"|plasmid No.8
|Not I
|Not I
|-
|-
|4
|4
-
|No.8
 
|EcoR I
|EcoR I
|-
|-
|5
|5
-
|No.8
 
| -
| -
|-
|-
|6
|6
-
|No.10
+
|rowspan="3"|plasmid No.10
|Not I
|Not I
|-
|-
|7
|7
-
|No.10
 
|EcoR I
|EcoR I
|-
|-
|8
|8
-
|No.10
 
| -
| -
|-
|-
|9
|9
-
|No.11
+
|rowspan="3"|plasmid No.11
|Not I
|Not I
|-
|-
|10
|10
-
|No.11
 
|EcoR I
|EcoR I
|-
|-
|11
|11
-
|No.11
 
| -
| -
|-
|-
|12
|12
-
|No.14
+
|rowspan="3"|plasmid No.14
|Not I
|Not I
|-
|-
|13
|13
-
|No.14
 
|EcoR I
|EcoR I
|-
|-
|14
|14
-
|No.14
 
| -
| -
|-
|-
|15
|15
-
|No.16
+
|rowspan="3"|plasmid No.16
|Not I
|Not I
|-
|-
|16
|16
-
|No.16
 
|EcoR I
|EcoR I
|-
|-
|17
|17
-
|No.16
 
| -
| -
|}
|}
 +
* 制限酵素の切れは悪いが，およそ1800 bpの位置にバンドが見られる
 +
->シークエンスをとって，結果の良さそうなものを翌日，2 piece ligation

Latest revision as of 06:42, 4 October 2010

Notebook

Miniprep

HokkaidoU Japan 20101003a.JPG

コロニー8, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16からミニプレキットでプラスミドを精製した
->うち1 uLを泳動して確認

  • Insertはおよそ1800 bp, Vectorはおよそ2500 b
  • コントロールの16番以外，それらしいバンドがある
  • 2 ug/uLくらいのDNA量と推定

Insertの確認

HokkaidoU Japan 20101003b.JPG

Miniprepで得たプラスミドをNot Iで処理すれば，約1800 bpのInsertが得られるはずである

well DNA RE
1 λ/Hind III (2 uL) -
2 pSB1T3 (1 uL) -
3 plasmid No.8 Not I
4 EcoR I
5 -
6 plasmid No.10 Not I
7 EcoR I
8 -
9 plasmid No.11 Not I
10 EcoR I
11 -
12 plasmid No.14 Not I
13 EcoR I
14 -
15 plasmid No.16 Not I
16 EcoR I
17 -
  • 制限酵素の切れは悪いが，およそ1800 bpの位置にバンドが見られる
->シークエンスをとって，結果の良さそうなものを翌日，2 piece ligation
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