Team:HokkaidoU Japan/Notebook/September3

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* pSB1C3を使ったトラフォメは全滅だった
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* pUC119では計20個ほどのコロニーしか得られなかった
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* 赤くなるはずが，赤くなっていなかったので，目的のInsertが入っていない可能性がある．
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* プロトコル：コロニーPCRに従って，実験した
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* extensionは120 sec
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* YM-10でClean Upしたら43 uLになった

Revision as of 12:53, 18 September 2010

前日のトラフォメの結果

  • pSB1C3を使ったトラフォメは全滅だった
  • pUC119では計20個ほどのコロニーしか得られなかった
  • 赤くなるはずが，赤くなっていなかったので，目的のInsertが入っていない可能性がある．

前日のトラフォメ菌のコロニーPCR

  • プロトコル：コロニーPCRに従って，実験した
  • 今回は20サンプルで行った

電気泳動

前日に使用したパーツの濃度測定

HokkaidoU Japan 20100903a.jpg

Ligationに使用したDNA solutionが予想通りの濃度だったのか確認した

  • 1:
  • 2: λ/Hind III, EcoR I
  • 3:
  • 4: RFP
  • 5: pUC119
  • 6: pSB1C3

1-3AのPCR

1-3AはpSB1C3に載ったRFP reporterで，トラフォメに成功している
ベクターとして配布されたpSB1C3が悪い可能性を見るため，このパーツのpSB1C3を増幅して使用する

1-3A 1
DW 33
10x Buffer 5
2 M 4dNTPs 5
25 mM MgSO4 3
Suffix-F 1
Prefix-R 1
KOD 1
Total 50 uL
  • extensionは120 sec
  • YM-10でClean Upしたら43 uLになった
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