Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August16

From 2010.igem.org

(Difference between revisions)
(New page: {{Template:HokkaidoU_Japan}})
Line 1: Line 1:
{{Template:HokkaidoU_Japan}}
{{Template:HokkaidoU_Japan}}
 +
=制限酵素の活性チェック=
 +
==制限酵素処理==
 +
<div style="float:left; margin-left:20px;">
 +
===EcoR I, Xba I, Pst I===
 +
{|style="text-align: center;"
 +
|-
 +
|pUC119
 +
|1 uL
 +
|-
 +
|DW
 +
|7 uL
 +
|-
 +
|10x M Buffer
 +
|1 uL
 +
|-
 +
|Restriction Enzyme
 +
|1 uL
 +
|-
 +
|style="border-top:1px solid #000"|'''Total'''
 +
|style="border-top:1px solid #000"|'''10 uL'''
 +
|}
 +
*  EcoR I, Xba I, Pst Iそれぞれ作る
 +
→37℃，60 min
 +
</div>
 +
<div style="float:left; margin-left:100px;">
 +
===Spe I===
 +
{|style="text-align: center;"
 +
|-
 +
|1-1A
 +
|1 uL
 +
|-
 +
|DW
 +
|7 uL
 +
|-
 +
|10x M Buffer
 +
|1 uL
 +
|-
 +
|Restriction Enzyme
 +
|1 uL
 +
|-
 +
|style="border-top:1px solid #000"|'''Total'''
 +
|style="border-top:1px solid #000"|'''10 uL'''
 +
|}
 +
* pUC119はSpe Iで切れないので，mini prepで得たプラスミドで確かめる
 +
→37℃，60 min
 +
</div>
 +
<div style="clear:both;"></div>
 +
===コントロール===
 +
* 1 uLのpUC119に? を加えた
 +
* 1 uLの1-1Aに？を加えた
 +
→37℃，60 min
 +
 +
==電気泳動==
 +
[[Image:HokkaidoU Japan 20100816a.jpg‎|200px|right|thumb|]]
 +
制限酵素処理した溶液に2 uLの6x Sample Bufferを加え，電気泳動した<br>
 +
{|style="margin-left:20px;"
 +
|-
 +
|レーン
 +
|
 +
|-
 +
|１
 +
|λ/''Hin''dIII
 +
|-
 +
|２
 +
|pUC119 コントロール
 +
|-
 +
|３
 +
|1-1A コントロール
 +
|-
 +
|４
 +
|pUC119 + EcoR I
 +
|-
 +
|５
 +
|pUC119 + Xba I
 +
|-
 +
|６
 +
|1-1A + Spe I
 +
|-
 +
|７
 +
|pUC119 + Pst I
 +
|-
 +
|８
 +
|空き
 +
|}
 +
 +
=ベクターの制限酵素処理 (EcoR I, Pst I)=
 +
{|style="text-align: center; margin-left:20px;"
 +
|-
 +
|pSB1C3
 +
|4 uL
 +
|-
 +
|DW
 +
|10 uL
 +
|-
 +
|10x M Buffer
 +
|2 uL
 +
|-
 +
|BSA
 +
|2 uL
 +
|-
 +
|EcoR I
 +
|1 uL
 +
|-
 +
|Pst I
 +
|1 uL
 +
|-
 +
|style="border-top:1px solid #000"|'''Total'''
 +
|style="border-top:1px solid #000"|'''20 uL'''
 +
|}
 +
 +
=パーツの制限酵素処理 (Xba I, Pst I)=
 +
<div style="float:left; margin-left:20px;">
 +
===RBS===
 +
{|style="text-align: center;"
 +
|-
 +
|1-2M
 +
|2.5 uL
 +
|-
 +
|DW
 +
|11.5 uL
 +
|-
 +
|10x M Buffer
 +
|2 uL
 +
|-
 +
|BSA
 +
|2 uL
 +
|-
 +
|Xba I
 +
|1 uL
 +
|-
 +
|Pst I
 +
|1 uL
 +
|-
 +
|style="border-top:1px solid #000"|'''Total'''
 +
|style="border-top:1px solid #000"|'''20 uL'''
 +
|}
 +
</div>
 +
<div style="float:left; margin-left:100px;">
 +
===Terminator===
 +
{|style="text-align: center;"
 +
|-
 +
|1-23L
 +
|1.5 uL
 +
|-
 +
|DW
 +
|12.5 uL
 +
|-
 +
|10x M Buffer
 +
|2 uL
 +
|-
 +
|BSA
 +
|2 uL
 +
|-
 +
|Xba I
 +
|1 uL
 +
|-
 +
|Pst I
 +
|1 uL
 +
|-
 +
|style="border-top:1px solid #000"|'''Total'''
 +
|style="border-top:1px solid #000"|'''20 uL'''
 +
|}
 +
</div>
 +
<div style="clear:both;"></div>
 +
 +
=パーツの制限酵素処理 (EcoR I, Spe I)=
 +
<div style="float:left; margin-left:20px;">
 +
===Heat shock promotor===
 +
{|style="text-align: center;"
 +
|-
 +
|3-1E
 +
|5 uL
 +
|-
 +
|DW
 +
|9.7 uL
 +
|-
 +
|10x M Buffer
 +
|2 uL
 +
|-
 +
|BSA
 +
|2 uL
 +
|-
 +
|EcoR I
 +
|1 uL
 +
|-
 +
|Spe I
 +
|0.3 uL
 +
|-
 +
|style="border-top:1px solid #000"|'''Total'''
 +
|style="border-top:1px solid #000"|'''20 uL'''
 +
|}
 +
</div>
 +
<div style="float:left; margin-left:50px;">
 +
===RFP===
 +
{|style="text-align: center;"
 +
|-
 +
|1-18F
 +
|5 uL
 +
|-
 +
|DW
 +
|9.7 uL
 +
|-
 +
|10x M Buffer
 +
|2 uL
 +
|-
 +
|BSA
 +
|2 uL
 +
|-
 +
|EcoR I
 +
|1 uL
 +
|-
 +
|Spe I
 +
|0.3 uL
 +
|-
 +
|style="border-top:1px solid #000"|'''Total'''
 +
|style="border-top:1px solid #000"|'''20 uL'''
 +
|}
 +
</div>
 +
<div style="clear:both;"></div>
 +
* 制限酵素の活性チェックでSpe Iの活性が低かったので，あとから0.7 uL加えた

Revision as of 11:33, 18 September 2010

制限酵素の活性チェック

制限酵素処理

EcoR I, Xba I, Pst I

pUC119 1 uL
DW 7 uL
10x M Buffer 1 uL
Restriction Enzyme 1 uL
Total 10 uL
  • EcoR I, Xba I, Pst Iそれぞれ作る

→37℃，60 min

Spe I

1-1A 1 uL
DW 7 uL
10x M Buffer 1 uL
Restriction Enzyme 1 uL
Total 10 uL
  • pUC119はSpe Iで切れないので，mini prepで得たプラスミドで確かめる

→37℃，60 min

コントロール

  • 1 uLのpUC119に? を加えた
  • 1 uLの1-1Aに？を加えた

→37℃，60 min

電気泳動

HokkaidoU Japan 20100816a.jpg

制限酵素処理した溶液に2 uLの6x Sample Bufferを加え，電気泳動した

レーン
１ λ/HindIII
２ pUC119 コントロール
３ 1-1A コントロール
４ pUC119 + EcoR I
５ pUC119 + Xba I
６ 1-1A + Spe I
７ pUC119 + Pst I
８ 空き

ベクターの制限酵素処理 (EcoR I, Pst I)

pSB1C3 4 uL
DW 10 uL
10x M Buffer 2 uL
BSA 2 uL
EcoR I 1 uL
Pst I 1 uL
Total 20 uL

パーツの制限酵素処理 (Xba I, Pst I)

RBS

1-2M 2.5 uL
DW 11.5 uL
10x M Buffer 2 uL
BSA 2 uL
Xba I 1 uL
Pst I 1 uL
Total 20 uL

Terminator

1-23L 1.5 uL
DW 12.5 uL
10x M Buffer 2 uL
BSA 2 uL
Xba I 1 uL
Pst I 1 uL
Total 20 uL

パーツの制限酵素処理 (EcoR I, Spe I)

Heat shock promotor

3-1E 5 uL
DW 9.7 uL
10x M Buffer 2 uL
BSA 2 uL
EcoR I 1 uL
Spe I 0.3 uL
Total 20 uL

RFP

1-18F 5 uL
DW 9.7 uL
10x M Buffer 2 uL
BSA 2 uL
EcoR I 1 uL
Spe I 0.3 uL
Total 20 uL
  • 制限酵素の活性チェックでSpe Iの活性が低かったので，あとから0.7 uL加えた
Retrieved from "http://2010.igem.org/Team:HokkaidoU_Japan/Notebook/August16"