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Template:KIT-Kyoto-Augsut18
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| + | :岩城、古道、竹内、中村 | ||
| - | 【実験名】 | + | 【実験名】 |
| - | (1) | + | :(1) BBa-K193602（melA）、BBa-K121013（GFP on pBS6）のストリーク |
| - | (2) | + | :(2) BBa-1732019、BBa-1732950のストリーク |
| - | (3) | + | :(3) コンピタントセルの調整（17日の続き） |
| - | (4) | + | :(4) l13522[2-(8A)]、R0040（1-6I）のトランスフォーメーション |
| - | (5) | + | :(5) pSB3K3、pSB6のプレカルチャー（←前日の大量培養がコンタミした為） |
| - | (6) | + | :(6) pSB1A2の大量培養 |
| - | (7) | + | :(7) pSB1C3（提出用ベクター）、pSB1A2（GFP on pSB1）のミディプレ |
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| - | + | 【実験目的】 | |
| - | (1) | + | :(1) BBa-K193602（melA）、BBa-K121013（GFP on pBS6）のシングルコロニーを得る |
| - | + | :(2) BBa-1732019、BBa-1732950のシングルコロニーを得る | |
| - | + | :(3) 作成したコンピタントセルの形質転換率の確認 | |
| - | (2) | + | :(4) l13522[2-(8A)]、R0040（1-6I）のトランスフォーメーション |
| - | + | :(5) 19日以降、pSB3K3、pSB6を大量培養する | |
| - | + | :(6) pSB1A2の大量培養 | |
| - | (3) | + | :(7) pSB1C3（提出用ベクター）、pSB1A2（GFP on pSB1）のミディプレ |
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| - | ( | + | 【実験内容】 |
| - | + | :(1) BBa-K193602（melA）、BBa-K121013（GFP on pBS6）をLBプレート（+amp）にストリーク | |
| - | + | ::↓37℃でインキュベートした（Overnight） | |
| - | ( | + | :(2) BBa-1732019、BBa-1732950をLBプレート（+amp）にストリーク |
| - | + | ::↓37℃でインキュベートした（Overnight） | |
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| - | ( | + | :(3) 前日のDH5αのプレートから、シングルコロニーをピックアップした |
| + | ::↓SOB培地 2mLに植え継ぎ、37℃、300rpmで6h 振とう培養した | ||
| + | ::↓その後、SOC培地 250mLにDH5α全量を入れ、18℃、250rpmで振とう培養した | ||
| + | ::↓吸光度測定した（＊実際は牛島さんに測っていただいた） | ||
| - | ( | + | :(4) l13522[2-(8A)]、R0040（1-6I）をDH5αにトランスフォーメーションした |
| - | + | ::↓37℃でインキュベートした（Overnight） | |
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| - | + | :(5) pSB3K3、pSB6のプレートから共に2番のシングルコロニーをピックアップした | |
| - | + | ::↓pSB3K3、pSB6をそれぞれLB培地（l）（+Km）、LB培地（l）（+amp）に植え継ぎ、37℃で振とう培養した | |
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| - | + | :(6) 前日2mLで振とう培養していたpSB1A2及び、pSB1C3を、それぞれLB培地（+amp）30mL、LB培地（＋ｸﾛﾗﾑﾌｪﾆｺｰﾑ）に大量培養した | |
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| - | + | :(7) 大量培養させておいたpSB1C3（提出用ベクター）、pSB1A2（GFP on pSB1）をそれぞれ50mLチューブに15～25mL程分注した | |
| - | + | ::↓比重計で、それぞれ等量を量った | |
| - | + | ::↓各チューブを4℃、4000×gで10min遠心した | |
| - | + | ::↓この間、カラムにEQ1 10mLを加え、カラムを平衡化した | |
| - | + | ::↓遠心後、上清を捨てた | |
| - | + | ::↓沈殿にR3 4mLを加えて、Vortexした | |
| - | + | ::↓L7 4mLを加え、やさしく混合し、5min室温放置した | |
| - | + | ::↓N3 4mLを加えた | |
| - | + | ::↓室温、12,000×gで10min遠心した | |
| - | + | ::↓上清を保存し、先程、平衡化させておいたカラムの上に全量加えた | |
| - | + | ::↓カラムの上にW8 10mLを加え、洗浄した（×２） | |
| - | + | ::↓カラムの下に15mLチューブを設置し、E4 5mLを加え、DNAを洗浄した | |
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| - | + | ||
| - | + | :＊以降の操作は翌日に繰り越した | |
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Revision as of 11:33, 9 September 2010
August 18
【時間】
- 9:00～
【実験担当】
- 岩城、古道、竹内、中村
【実験名】
- (1) BBa-K193602（melA）、BBa-K121013（GFP on pBS6）のストリーク
- (2) BBa-1732019、BBa-1732950のストリーク
- (3) コンピタントセルの調整（17日の続き）
- (4) l13522[2-(8A)]、R0040（1-6I）のトランスフォーメーション
- (5) pSB3K3、pSB6のプレカルチャー（←前日の大量培養がコンタミした為）
- (6) pSB1A2の大量培養
- (7) pSB1C3（提出用ベクター）、pSB1A2（GFP on pSB1）のミディプレ
【実験目的】
- (1) BBa-K193602（melA）、BBa-K121013（GFP on pBS6）のシングルコロニーを得る
- (2) BBa-1732019、BBa-1732950のシングルコロニーを得る
- (3) 作成したコンピタントセルの形質転換率の確認
- (4) l13522[2-(8A)]、R0040（1-6I）のトランスフォーメーション
- (5) 19日以降、pSB3K3、pSB6を大量培養する
- (6) pSB1A2の大量培養
- (7) pSB1C3（提出用ベクター）、pSB1A2（GFP on pSB1）のミディプレ
【実験内容】
- (1) BBa-K193602（melA）、BBa-K121013（GFP on pBS6）をLBプレート（+amp）にストリーク
- ↓37℃でインキュベートした（Overnight）
- (2) BBa-1732019、BBa-1732950をLBプレート（+amp）にストリーク
- ↓37℃でインキュベートした（Overnight）
- (3) 前日のDH5αのプレートから、シングルコロニーをピックアップした
- ↓SOB培地 2mLに植え継ぎ、37℃、300rpmで6h 振とう培養した
- ↓その後、SOC培地 250mLにDH5α全量を入れ、18℃、250rpmで振とう培養した
- ↓吸光度測定した（＊実際は牛島さんに測っていただいた）
- (4) l13522[2-(8A)]、R0040（1-6I）をDH5αにトランスフォーメーションした
- ↓37℃でインキュベートした（Overnight）
- (5) pSB3K3、pSB6のプレートから共に2番のシングルコロニーをピックアップした
- ↓pSB3K3、pSB6をそれぞれLB培地（l）（+Km）、LB培地（l）（+amp）に植え継ぎ、37℃で振とう培養した
- (6) 前日2mLで振とう培養していたpSB1A2及び、pSB1C3を、それぞれLB培地（+amp）30mL、LB培地（＋ｸﾛﾗﾑﾌｪﾆｺｰﾑ）に大量培養した
- (7) 大量培養させておいたpSB1C3（提出用ベクター）、pSB1A2（GFP on pSB1）をそれぞれ50mLチューブに15～25mL程分注した
- ↓比重計で、それぞれ等量を量った
- ↓各チューブを4℃、4000×gで10min遠心した
- ↓この間、カラムにEQ1 10mLを加え、カラムを平衡化した
- ↓遠心後、上清を捨てた
- ↓沈殿にR3 4mLを加えて、Vortexした
- ↓L7 4mLを加え、やさしく混合し、5min室温放置した
- ↓N3 4mLを加えた
- ↓室温、12,000×gで10min遠心した
- ↓上清を保存し、先程、平衡化させておいたカラムの上に全量加えた
- ↓カラムの上にW8 10mLを加え、洗浄した（×２）
- ↓カラムの下に15mLチューブを設置し、E4 5mLを加え、DNAを洗浄した
- ＊以降の操作は翌日に繰り越した
