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Template:KIT-Kyoto-Augsut15
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| - | + | 【時間】 9:00～18:00 | |
| + | 【実験担当】坂田（15:00∼）,臼井,革島,中村,吉村 | ||
| + | 【実験名】 | ||
| + | :(1)pSB3K3のアルカリミニプレップ | ||
| + | :(2)pSB1及びpSB3K3の制限酵素処理及び電気泳動 | ||
| + | :(3)1％アガロースゲルの作成 | ||
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| + | 【実験目的】 | ||
| + | :(1)pSB3K3のアルカリミニプレップ | ||
| + | :(2)pSB1及びpSB3K3が正しく制限酵素処理されているかどうかを確認する | ||
| + | :(3)1％アガロースゲルの作成 | ||
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| + | 【実験内容】 | ||
| + | :（1）pSB3K3のアルカリミニプレップ | ||
| + | :培養後のpSB3K3を1.5mLエッペンチューブに取った | ||
| + | : ↓4℃、15,000rpm、5min遠心 | ||
| + | :上澄みをデカンテーションで取り除いた | ||
| + | : ↓ | ||
| + | :菌体ペレットを氷冷したSoltionⅠ100μLに懸濁(vortex)した | ||
| + | : ↓ | ||
| + | :SolutionⅡ200μLを加え混合(vortex不可)した | ||
| + | : ↓5min on ice | ||
| + | :SolutionⅢ150μLを加え混合(vortex)した | ||
| + | : ↓5min on ice | ||
| + | :4℃、15,000rpm、10min遠心した | ||
| + | : ↓ | ||
| + | :上澄みを新しい1.5mLマイクロチューブに移した | ||
| + | : ↓ | ||
| + | :等量(400μL)イソプロピルアルコールを加えた | ||
| + | : ↓4℃、15,000rpm、20min遠心した | ||
| + | :70％EtOHを1mL加えた(vortex) | ||
| + | : ↓4℃、15,000rpm、10min遠心した | ||
| + | :上澄みを捨てた | ||
| + | : ↓30sec 遠心乾燥した | ||
| + | :RNase in TE30μL加えてプラスミドDNAにした | ||
| + | : | ||
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| + | :（2）pSB1のカットチェック | ||
| + | ::〈組成〉 | ||
| + | ::pSB1A2 5μL | ||
| + | ::EcoRⅠ 1μL | ||
| + | ::PstⅠ 1μL | ||
| + | ::Buffer(H) 1μL | ||
| + | ::H2O 11μL | ||
| + | :: 計 20μL | ||
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| + | ::pSB3K3 5μL | ||
| + | ::EcoRⅠ 1μL | ||
| + | ::PstⅠ 1μL | ||
| + | ::Buffer(H) 1μL | ||
| + | ::H2O 11μL | ||
| + | :: 計 20μL | ||
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| + | :これを1h,37℃でインキュベートした | ||
| + | : ↓ | ||
| + | : Loading Buffer 1μLを加えたものと、マーカー(1kbp radder)を | ||
| + | :1% Agarose Gel のコームに流し込んだ | ||
| + | : ↓100V,30min泳動した | ||
| + | : ↓EtBr(10mg/mL)で20min染色した | ||
| + | :泳動結果を写真で撮影した | ||
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| + | 【実験結果】 | ||
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| + | :（2）pSB1A2 | ||
| + | : →4つ中2番にバンドが確認された。 | ||
| + | : 2番（プレカルチャーしておいたもの）にLB培地(amp+)2mLを加え、振とう培養した。 | ||
| + | :（3）pSB3K3 | ||
| + | : →4つ中1，2番の2本にバンドが確認された。 | ||
| + | : LB培地（kan+）2mLを加え、振とう培養した。 | ||
Revision as of 05:05, 7 September 2010
Augsut 15
【時間】 9:00～18:00 【実験担当】坂田（15:00∼）,臼井,革島,中村,吉村 【実験名】
- (1)pSB3K3のアルカリミニプレップ
- (2)pSB1及びpSB3K3の制限酵素処理及び電気泳動
- (3)1％アガロースゲルの作成
【実験目的】
- (1)pSB3K3のアルカリミニプレップ
- (2)pSB1及びpSB3K3が正しく制限酵素処理されているかどうかを確認する
- (3)1％アガロースゲルの作成
【実験内容】
- （1）pSB3K3のアルカリミニプレップ
- 培養後のpSB3K3を1.5mLエッペンチューブに取った
- ↓4℃、15,000rpm、5min遠心
- 上澄みをデカンテーションで取り除いた
- ↓
- 菌体ペレットを氷冷したSoltionⅠ100μLに懸濁(vortex)した
- ↓
- SolutionⅡ200μLを加え混合(vortex不可)した
- ↓5min on ice
- SolutionⅢ150μLを加え混合(vortex)した
- ↓5min on ice
- 4℃、15,000rpm、10min遠心した
- ↓
- 上澄みを新しい1.5mLマイクロチューブに移した
- ↓
- 等量(400μL)イソプロピルアルコールを加えた
- ↓4℃、15,000rpm、20min遠心した
- 70％EtOHを1mL加えた(vortex)
- ↓4℃、15,000rpm、10min遠心した
- 上澄みを捨てた
- ↓30sec 遠心乾燥した
- RNase in TE30μL加えてプラスミドDNAにした
- （2）pSB1のカットチェック
- 〈組成〉
- pSB1A2 5μL
- EcoRⅠ 1μL
- PstⅠ 1μL
- Buffer(H) 1μL
- H2O 11μL
- 計 20μL
- pSB3K3 5μL
- EcoRⅠ 1μL
- PstⅠ 1μL
- Buffer(H) 1μL
- H2O 11μL
- 計 20μL
- これを1h,37℃でインキュベートした
- ↓
- Loading Buffer 1μLを加えたものと、マーカー(1kbp radder)を
- 1% Agarose Gel のコームに流し込んだ
- ↓100V,30min泳動した
- ↓EtBr(10mg/mL)で20min染色した
- 泳動結果を写真で撮影した
【実験結果】
- （2）pSB1A2
- →4つ中2番にバンドが確認された。
- 2番（プレカルチャーしておいたもの）にLB培地(amp+)2mLを加え、振とう培養した。
- （3）pSB3K3
- →4つ中1，2番の2本にバンドが確認された。
- LB培地（kan+）2mLを加え、振とう培養した。
