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Team:UT-Tokyo/Protocol
From 2010.igem.org
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プラスミド精製（Miniprep・ミニプレ） | プラスミド精製（Miniprep・ミニプレ） | ||
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制限酵素処理（Xba1/Pst1）—同時にやるとき | 制限酵素処理（Xba1/Pst1）—同時にやるとき | ||
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制限酵素処理—ひとつずつやるとき | 制限酵素処理—ひとつずつやるとき | ||
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PCR（Pfu Ultra） | PCR（Pfu Ultra） | ||
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PCR（Ex- Taq） | PCR（Ex- Taq） | ||
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PCR（KODplus） | PCR（KODplus） | ||
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コロニー PCR（Ex-Taq） | コロニー PCR（Ex-Taq） | ||
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電気泳動 | 電気泳動 | ||
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ゲルから切り出し・プラスミド精製 | ゲルから切り出し・プラスミド精製 | ||
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LB broth | LB broth | ||
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アガロースゲル | アガロースゲル | ||
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シークエンス | シークエンス | ||
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コンピテントセルの作り方 | コンピテントセルの作り方 | ||
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| + | <html> | ||
| + | ・iGEM parts / ligation products<br/> | ||
| + | ・LBbroth (No antibiotic) 500?L<br/> | ||
| + | ・TE 15?L<br/> | ||
| + | ・competent cells<br/> | ||
| + | ・plates<br/> | ||
| + | ・ice box<br/> | ||
| + | ・heat block(42℃)<br/> | ||
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| - | + | ===Protocol=== | |
| - | + | Prepping DNA from the kit plates | |
| + | #With a pipette tip, punch a hole through the foil cover into the corresponding well to the Biobrick^(TM)-standard part that you want. Make sure you have properly oriented the plate. We recommend that you do not remove the foil cover, as it could lead to cross contamination between the wells. | ||
| + | #Add 15uL of TE (MilliQ),and pipetting | ||
| + | #Pipette 1uL of the resuspended DNA Transformation into your desired competent cells. | ||
| + | #Hold on ice for 30 mins. | ||
| + | #Heat shock at 42°C for 45 seconds. | ||
| + | #Add 300uL of LBborth in each epp. | ||
| + | #Wait 10 mins. | ||
| + | #Hold at 37℃ for 30 mins. | ||
| + | #Plate out. | ||
| + | #Incubatet at 37°C | ||
| + | |||
iGEMパーツを解凍する場合 | iGEMパーツを解凍する場合 | ||
↓P200のピペットマンにチップを付け、チップでフィルムに孔を空ける。 | ↓P200のピペットマンにチップを付け、チップでフィルムに孔を空ける。 | ||
| - | ↓add | + | ↓add 15?l TE（MilliQで可）、ピペッティング |
| - | + | ↓1?lをコンピテントセルにいれ30min on ice(コンピに対し1/5倍量以下になるように) | |
↓42℃45sec（終わったらon ice） | ↓42℃45sec（終わったらon ice） | ||
↓10分くらい待つ | ↓10分くらい待つ | ||
| - | + | ↓エッペンにLBbroth300?l加える | |
↓37℃30min（ampなら省略可能） | ↓37℃30min（ampなら省略可能） | ||
※常温15minでも可 | ※常温15minでも可 | ||
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↓37℃30min（ampなら省略可能） | ↓37℃30min（ampなら省略可能） | ||
※常温15minでも可 | ※常温15minでも可 | ||
Latest revision as of 15:28, 27 August 2010
Protocol
前培養/トラフォメ（形質転換）
コロニーピックアップ・前培養
プラスミド精製（Miniprep・ミニプレ）
制限酵素処理（Xba1/Pst1）—同時にやるとき
制限酵素処理—ひとつずつやるとき
PCR（Pfu Ultra）
PCR（Ex- Taq）
PCR（KODplus）
コロニー PCR（Ex-Taq）
電気泳動
ゲルから切り出し・プラスミド精製
LB broth
アガロースゲル
シークエンス
コンピテントセルの作り方
例．
Transformation
preparation
・iGEM parts / ligation products
・LBbroth (No antibiotic) 500?L
・TE 15?L
・competent cells
・plates
・ice box
・heat block(42℃)
-Notice
competent cells
→ always onice!!! Melt on ice! Mix DNA as soon as cells melt!
Protocol
Prepping DNA from the kit plates
- With a pipette tip, punch a hole through the foil cover into the corresponding well to the Biobrick^(TM)-standard part that you want. Make sure you have properly oriented the plate. We recommend that you do not remove the foil cover, as it could lead to cross contamination between the wells.
- Add 15uL of TE (MilliQ),and pipetting
- Pipette 1uL of the resuspended DNA Transformation into your desired competent cells.
- Hold on ice for 30 mins.
- Heat shock at 42°C for 45 seconds.
- Add 300uL of LBborth in each epp.
- Wait 10 mins.
- Hold at 37℃ for 30 mins.
- Plate out.
- Incubatet at 37°C
iGEMパーツを解凍する場合 ↓P200のピペットマンにチップを付け、チップでフィルムに孔を空ける。 ↓add 15?l TE（MilliQで可）、ピペッティング ↓1?lをコンピテントセルにいれ30min on ice(コンピに対し1/5倍量以下になるように) ↓42℃45sec（終わったらon ice） ↓10分くらい待つ ↓エッペンにLBbroth300?l加える ↓37℃30min（ampなら省略可能） ※常温15minでも可 ↓プレートに撒く
３７℃でインキュベーション
プレートはふたを下にしてインキュベーションする
8/6更新
Ligation products
↓ライゲーション産物10ulに対し、コンピテントセル50ｕlを混合
↓よく混ぜてonice30分
↓42℃45sec（終わったらon ice） ↓10分くらい待つ ↓エッペンにLBbroth300?l加える ↓37℃30min（ampなら省略可能） ※常温15minでも可 ↓プレートに撒く
３７℃でインキュベーション（ふたを下にしてインキュベーションする）
