Template:KIT-Kyoto-September1

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September 1

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Time

9:00~

Member

岩城、古道
Iwaki,Furumichi

Purpose

(1) pSB1A2(E0420)、pSB1A2(E0430)、
pSB1A2(I13507)、pSB6A1(K121013)のアルカリミニプレップ、DNA濃度測定 [古道]
(2) アルカリミニプレップ済の
pSB1A2(E0420)9/1付け、pSB1A2(E0430)9/1付け、
pSB1A2(I13507)9/1付け、pSB6A1(K121013)の制限酵素処理 [古道]

Method

(1) pSB1A2(E0420)、pSB1A2(E0430)、
pSB1A2(I13507)、pSB6A1(K121013)のアルカリミニプレップ、DNA濃度測定
 培養済のpSB1A2(E0420)、pSB1A2(E0430)、
 pSB1A2(I13507)、pSB6A1(K121013)を1.5mlエッペンに集菌した
 ↓菌体を氷令したSoltionⅠ100µlに懸濁しvortexした
 ↓SoltionⅡ200µl加え混合し氷上に5分放置した
 ↓SoltionⅢ150µl加え混合し氷上に5分放置した
 ↓4℃、14,000rpmで10分間遠心した
 ↓上清を回収しφOH/CIAAを200µl加え14000rpmで5分間遠心した
 ↓上清を回収しCIAA を200µl加え14000rpmで5分間遠心した
 ↓上清を回収し400µlのイソプロパノールを加え混ぜた
 ↓4℃、14,000rpmで20分間遠心した
 ↓上澄みを捨て70%エタノールを200µl加えvortexした
 ↓4℃、14,000rpmで10分間遠心した
 ↓上澄みを捨てて5分間、37℃インキュベートで乾燥させた
 ↓RNase入りTE(10µg/ml)30µlを加え37℃で30分間インキュベートした
 ↓吸光度測定をした
 ↓8/31にアルカリミニプレップ処理をしたpSB1A2(E0420)、
  pSB1A2(E0430)、pSB1A2(I13507)も吸光度測定を行った
(2) アルカリミニプレップ済の
pSB1A2(E0420)9/1付け、pSB1A2(E0430)9/1付け、
pSB1A2(I13507)9/1付け、pSB6A1(K121013)の制限酵素処理
 下の組成の通りに1.5mlエッペンに分注した
pSB6A1
(BBa_K121013)
pSB1A2
(BBa_E0420:CFP)
pSB1A2
(BBa_I13507:RFP)
pSB1A2
(BBa_E0430:YFP)
DNA80µl70µl110µl90µl
H2O9.4µl19.4µl24.4µl44.4µl
H buffer10µl10µl15µl15µl
EcoR0.3µl0.3µl0.3µl0.3µl
Pst0.3µl0.3µl0.3µl0.3µl
total100µl100µl150µl150µl
 ↓37℃で一晩インキュベートした


Results

(1) 吸光度測定結果
8/31付け
pSB1A2(E0420)
(100倍希釈)
1.176
1.120
1.104
1.089
1.088
平均1.1154
濃度:5.58×103(µg/ml)
8/31付け
pSB1A2(BBa_E0430:YFP)
(100倍希釈)
1.322
1.310
1.309
1.292
1.286
平均1.3038
濃度:6.51×103(µg/ml)
8/31付け
pSB1A2(I13507)
(100倍希釈)
1.134
1.114
1.110
1.102
1.104
平均1.1128
濃度:5.56×103(µg/ml)
9/1付け
pSB1A2(BBa_E0420:CFP)
(100倍希釈)
1.318
1.309
1.316
1.320
1.327
平均1.318
濃度:6.59×103(µg/ml)
9/1付け
pSB1A2(E0430)
(100倍希釈)
1.567
1.538
1.528
1.516
1.490
平均1.5278
濃度:7.64×103(µg/ml)
9/1付け
pSB1A2(I13507)
(100倍希釈)
1.193
1.169
1.196
1.188
1.189
平均1.187
濃度:5.935×103(µg/ml)

pSB6A1(K121013)
(100倍希釈)
1.193
1.390
1.378
1.362
1.336
平均1.3712
濃度:6.91×103(µg/ml)
(2) 一晩、制限酵素処理した後、DNA抽出を行う