Template:KIT-Kyoto-Augsut18

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【実験内容】
【実験内容】
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:(1)　BBa-K193602（melA）、BBa-K121013（GFP on pBS6）をLBプレート（+amp）にストリーク
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:(1)　BBa-K193602（melA）、BBa-K121013（GFP on pBS6）のストリーク
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::↓37℃でインキュベートした（Overnight）
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::　BBa-K193602（melA）、BBa-K121013（GFP on pBS6）をLBプレート（+amp）にストリーク
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::　↓37℃でインキュベートした（Overnight）
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:(2)　BBa-1732019、BBa-1732950をLBプレート（+amp）にストリーク
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::↓37℃でインキュベートした（Overnight）
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::　BBa-1732019、BBa-1732950をLBプレート（+amp）にストリーク
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::　↓37℃でインキュベートした（Overnight）
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:(3)　前日のDH5αのプレートから、シングルコロニーをピックアップした
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:(3)　コンピタントセルの調整（17日の続き）
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::↓SOB培地 2mLに植え継ぎ、37℃、300rpmで6h 振とう培養した
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::　前日のDH5αのプレートから、シングルコロニーをピックアップした
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::↓その後、SOC培地 250mLにDH5α全量を入れ、18℃、250rpmで振とう培養した
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::　↓SOB培地 2mLに植え継ぎ、37℃、300rpmで6h 振とう培養した
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::↓吸光度測定した（＊実際は牛島さんに測っていただいた）
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::　↓その後、SOC培地 250mLにDH5α全量を入れ、18℃、250rpmで振とう培養した
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:(4)　l13522[2-(8A)]、R0040（1-6I）をDH5αにトランスフォーメーションした
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:(4)　l13522[2-(8A)]、R0040（1-6I）のトランスフォーメーション
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::↓37℃でインキュベートした（Overnight）
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::　↓37℃でインキュベートした（Overnight）
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:(5)　pSB3K3、pSB6のプレートから共に2番のシングルコロニーをピックアップした
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:(5)　pSB3K3、pSB6のプレカルチャー（←前日の大量培養がコンタミした為）
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::↓pSB3K3、pSB6をそれぞれLB培地（l）（+Km）、LB培地（l）（+amp）に植え継ぎ、37℃で振とう培養した
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::　pSB3K3、pSB6のプレートから共に2番のシングルコロニーをピックアップした
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::　↓pSB3K3、pSB6をそれぞれLB培地（l）（+Km）、LB培地（l）（+amp）に植え継ぎ、37℃で振とう培養した
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:(6)　前日2mLで振とう培養していたpSB1A2及び、pSB1C3を、それぞれLB培地（+amp）30mL、LB培地（＋ｸﾛﾗﾑﾌｪﾆｺｰﾑ）に大量培養した
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:(6)　pSB1A2の大量培養
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::　前日2mLで振とう培養していたpSB1A2及び、pSB1C3を、それぞれLB培地（+amp）30mL、LB培地（＋ｸﾛﾗﾑﾌｪﾆｺｰﾑ）に大量培養した
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:(7)　大量培養させておいたpSB1C3（提出用ベクター）、pSB1A2（GFP on pSB1）をそれぞれ50mLチューブに15～25mL程分注した
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:(7)　pSB1C3（提出用ベクター）、pSB1A2（GFP on pSB1）のミディプレ
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::↓比重計で、それぞれ等量を量った
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::　大量培養させておいたpSB1C3（提出用ベクター）、pSB1A2（GFP on pSB1）をそれぞれ50mLチューブに15～25mL程分注した
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::↓各チューブを4℃、4000×gで10min遠心した
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::　↓比重計で、それぞれ等量を量った
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::↓この間、カラムにEQ1 10mLを加え、カラムを平衡化した
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::　↓各チューブを4℃、4000×gで10min遠心した
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::↓遠心後、上清を捨てた
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::　↓この間、カラムにEQ1 10mLを加え、カラムを平衡化した
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::↓沈殿にR3 4mLを加えて、Vortexした
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::↓L7 4mLを加え、やさしく混合し、5min室温放置した
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::　↓沈殿にR3 4mLを加えて、Vortexした
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::↓N3 4mLを加えた
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::　↓L7 4mLを加え、やさしく混合し、5min室温放置した
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::↓室温、12,000×gで10min遠心した
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::　↓N3 4mLを加えた
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::↓上清を保存し、先程、平衡化させておいたカラムの上に全量加えた
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::　↓室温、12,000×gで10min遠心した
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::↓カラムの上にW8 10mLを加え、洗浄した（×２）
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::　↓上清を保存し、先程、平衡化させておいたカラムの上に全量加えた
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::↓カラムの下に15mLチューブを設置し、E4 5mLを加え、DNAを洗浄した
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::　↓カラムの下に15mLチューブを設置し、E4 5mLを加え、DNAを洗浄した
:＊以降の操作は翌日に繰り越した
:＊以降の操作は翌日に繰り越した

Revision as of 11:41, 9 September 2010

August 18

【時間】　

9:00～

【実験担当】

岩城、古道、竹内、中村

【実験名】

(1)　BBa-K193602（melA）、BBa-K121013（GFP on pBS6）のストリーク
(2)　BBa-1732019、BBa-1732950のストリーク
(3)　コンピタントセルの調整（17日の続き）
(4)　l13522[2-(8A)]、R0040（1-6I）のトランスフォーメーション
(5)　pSB3K3、pSB6のプレカルチャー（←前日の大量培養がコンタミした為）
(6)　pSB1A2の大量培養
(7)　pSB1C3（提出用ベクター）、pSB1A2（GFP on pSB1）のミディプレ

【実験目的】

(1)　BBa-K193602（melA）、BBa-K121013（GFP on pBS6）のシングルコロニーを得る
(2)　BBa-1732019、BBa-1732950のシングルコロニーを得る
(3)　作成したコンピタントセルの形質転換率の確認
(4)　l13522[2-(8A)]、R0040（1-6I）のトランスフォーメーション
(5)　19日以降、pSB3K3、pSB6を大量培養する
(6)　pSB1A2の大量培養
(7)　pSB1C3（提出用ベクター）、pSB1A2（GFP on pSB1）のミディプレ

【実験内容】

(1)　BBa-K193602（melA）、BBa-K121013（GFP on pBS6）のストリーク
　BBa-K193602（melA）、BBa-K121013（GFP on pBS6）をLBプレート（+amp）にストリーク
　↓37℃でインキュベートした（Overnight）
(2)　BBa-1732019、BBa-1732950のストリーク
　BBa-1732019、BBa-1732950をLBプレート（+amp）にストリーク
　↓37℃でインキュベートした（Overnight）
(3)　コンピタントセルの調整（17日の続き）
　前日のDH5αのプレートから、シングルコロニーをピックアップした
　↓SOB培地 2mLに植え継ぎ、37℃、300rpmで6h 振とう培養した
　↓その後、SOC培地 250mLにDH5α全量を入れ、18℃、250rpmで振とう培養した
　↓吸光度測定した（＊実際は牛島さんに測っていただいた）
(4)　l13522[2-(8A)]、R0040（1-6I）のトランスフォーメーション
　l13522[2-(8A)]、R0040（1-6I）をDH5αにトランスフォーメーションした
　↓37℃でインキュベートした（Overnight）
(5)　pSB3K3、pSB6のプレカルチャー（←前日の大量培養がコンタミした為）
　pSB3K3、pSB6のプレートから共に2番のシングルコロニーをピックアップした
　↓pSB3K3、pSB6をそれぞれLB培地（l）（+Km）、LB培地（l）（+amp）に植え継ぎ、37℃で振とう培養した
(6)　pSB1A2の大量培養
　前日2mLで振とう培養していたpSB1A2及び、pSB1C3を、それぞれLB培地（+amp）30mL、LB培地（＋ｸﾛﾗﾑﾌｪﾆｺｰﾑ）に大量培養した
(7)　pSB1C3（提出用ベクター）、pSB1A2（GFP on pSB1）のミディプレ
　大量培養させておいたpSB1C3（提出用ベクター）、pSB1A2（GFP on pSB1）をそれぞれ50mLチューブに15～25mL程分注した
　↓比重計で、それぞれ等量を量った
　↓各チューブを4℃、4000×gで10min遠心した
　↓この間、カラムにEQ1 10mLを加え、カラムを平衡化した
　↓遠心後、上清を捨てた
　↓沈殿にR3 4mLを加えて、Vortexした
　↓L7 4mLを加え、やさしく混合し、5min室温放置した
　↓N3 4mLを加えた
　↓室温、12,000×gで10min遠心した
　↓上清を保存し、先程、平衡化させておいたカラムの上に全量加えた
　↓カラムの上にW8 10mLを加え、洗浄した（×２）
　↓カラムの下に15mLチューブを設置し、E4 5mLを加え、DNAを洗浄した


＊以降の操作は翌日に繰り越した
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