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From 2010.igem.org

August 11

Time

9:00～21:00

Member

岩城,福山,竹内,臼井,足立

Iwaki,Fukuyama,Takeuchi,Usui,Adachi

Purpose

1. pSB6A1(J04450)and pSB1A2(J44000) transformed into the competent cells(DH5Alpha)

(1)　iGEM本部から送られてきたプラスミドを増やすために大腸菌に形質転換する

Method

(1)　pSB6A1(J04450)及びpsB1A2(J44000)のトランスフォーメーション

　-80℃で保存していたコンピタントセル(DH5α)を氷上で溶解した

　↓DH5α 100 μLを2本のチューブに分注した

　↓それぞれのチューブにpSB6A1(J04450)、psB1A2(J44000)を1 μL加えた

　↓on　ice　30min

　↓45℃で45sec、ヒートショックを行った

　↓on　ice　2min

　↓各チューブにSOC培地を、0.9mLずつ加えた

　↓37℃で1h、振とう培養した

　↓全量をLBプレート(+amp)に撒き、37℃で一晩培養した

Results

(1)　翌日、シングルコロニーの生育が確認できた

Consideration

(1)　生育が確認できたら、シングルコロニーをピックアップし液体培地で培養する

August 12

Time

9:00～18:00

Member

岩城,福山,竹内,臼井,足立

Iwaki,Fukuyama,Takeuchi,Usui,Adachi

Title

1. Preculture pSB6 and psB1

2. Digested pGVBptt and Ran on a Gel

3. psB3K3(J04450) transformed into the competent cells(DH5Alpha)

(1)　pSB6及びpsB1(非パーツ)のプレカルチャー

(2)　pGVBpttの電気泳動

(3)　psB3K3(J04450)のトランスフォーメーション

Purpose

(1)　pSB6A1(K121013)及びpsB1(非パーツ)のプレカルチャー

(2)　pGVBpttが正しく制限酵素処理されているかどうかを確認するため

(3)　psB3K3(J04450)のトランスフォーメーション

Method

(1)　pSB6及びpsB1(非パーツ)のプレカルチャー

　DH5α-pSB6,DH5α-pSB1をそれぞれ液体LB培地(+amp)2mLで培養した

(2)　pGVBpttの電気泳動

＜組成＞ pGVBppt 5μL KpmI 1μL HindⅢ 1μL Buffer M 1μL H2O 11μL 計 20μL

これを37℃で1時間インキュベートした ↓Loading Buffer 1μLを加えたものとマーカー(1kbp radder)を 　1% Agarose Gelのコームに流し込んだ ↓100Vで30分間泳動した ↓EtBr(10mg/mL)で20分間染色した ↓泳動結果を写真で撮影した

(3)　psB3K3(J04450)のトランスフォーメーション

　psB3K3にSOCを0.9mL加え、DH5αにトランスフォーメーションした

　↓37℃でインキュベートした(Overnight)