Team:UT-Tokyo/Protocol

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Protocol

前培養/トラフォメ(形質転換)

コロニーピックアップ・前培養

プラスミド精製(Miniprep・ミニプレ)

制限酵素処理(Xba1/Pst1)—同時にやるとき

制限酵素処理—ひとつずつやるとき

PCR(Pfu  Ultra)

PCR(Ex- Taq)

PCR(KODplus)

コロニー PCR(Ex-Taq)

電気泳動

ゲルから切り出し・プラスミド精製

LB  broth

アガロースゲル

シークエンス

コンピテントセルの作り方

例.


Transformation

preparation

    • iGEM parts / ligation products

-LBbroth (No antibiotic) 500uL

・TE 15uL

・competent cells

・plates

・ice box

・heat block(42℃)


-Notice

competent cells

→ always onice!!! Melt on ice! Mix DNA as soon as cells melt!


-Protocol

iGEMパーツを解凍する場合 ↓P200のピペットマンにチップを付け、チップでフィルムに孔を空ける。 ↓add 15µl TE(MilliQで可)、ピペッティング ↓1µlをコンピテントセルにいれ30min on ice(コンピに対し1/5倍量以下になるように) ↓42℃45sec(終わったらon ice) ↓10分くらい待つ ↓エッペンにLBbroth300µl加える ↓37℃30min(ampなら省略可能) ※常温15minでも可 ↓プレートに撒く

37℃でインキュベーション

プレートはふたを下にしてインキュベーションする

8/6更新

Ligation products

↓ライゲーション産物10ulに対し、コンピテントセル50ulを混合

↓よく混ぜてonice30分

↓42℃45sec(終わったらon ice) ↓10分くらい待つ ↓エッペンにLBbroth300µl加える ↓37℃30min(ampなら省略可能) ※常温15minでも可 ↓プレートに撒く

37℃でインキュベーション(ふたを下にしてインキュベーションする)


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