Team:UT-Tokyo/Protocol

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Notebook

Our experiment notebooks (Japanese) can be read [http://www.igem-ut.net/blog/ here (www.igem-ut.net/blog) ].


Protocol

Transformation

-preparation ・iGEM parts / ligation products ・LBbroth (No antibiotic) 500uL ・TE 15uL ・competent cells ・plates ・ice box ・heat block(42℃)

-Notice competent cells → always onice!!! Melt on ice! Mix DNA as soon as cells melt!

-Protocol iGEMパーツを解凍する場合 ↓P200のピペットマンにチップを付け、チップでフィルムに孔を空ける。 ↓add 15µl TE(MilliQで可)、ピペッティング ↓1µlをコンピテントセルにいれ30min on ice(コンピに対し1/5倍量以下になるように) ↓42℃45sec(終わったらon ice) ↓10分くらい待つ ↓エッペンにLBbroth300µl加える ↓37℃30min(ampなら省略可能) ※常温15minでも可 ↓プレートに撒く

37℃でインキュベーション

プレートはふたを下にしてインキュベーションする

8/6更新

Ligation products

↓ライゲーション産物10ulに対し、コンピテントセル50ulを混合

↓よく混ぜてonice30分

↓42℃45sec(終わったらon ice) ↓10分くらい待つ ↓エッペンにLBbroth300µl加える ↓37℃30min(ampなら省略可能) ※常温15minでも可 ↓プレートに撒く

37℃でインキュベーション(ふたを下にしてインキュベーションする)


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