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	==October 10 (Sun)==		==October 10 (Sun)==
-	#Electrophoresis	+	# Electrophoresis
-	dye 2μｌ, sample, ladder 5μｌ.	+
-	1% Agalose gel  50V 5min  100V 23min	+
-		+
	#Ligation		#Ligation
-	048(C)	+	#*048(C) R1 + FcenA
-	R1 (ES)  10/3                      6μl	+	#*060(C) 001-2 + GeneⅢ
-	FcenA (XP)  10/1                    2μl	+	#*051(C) R2 + 022
-	1-3A(EP)  10/9                      2μl	+	#*066(A) 3-2P + 026
-	10×T4 DNA ligase Buffer        2μｌ	+	#*069(A) 049 + 026
-	T4 DNA ligase                        0.5μｌ	+	#*070(A) 052 + 026
-	DSW                                      7.5μｌ	+	#mini prep
-	total                                        20μｌ	+	#*058①,051②,016①,013②
-		+	#cut check
-	060(C)	+	#*016①,058①,013②,051②,1-13D,050①,025②
-	001-2 (ES)  9/27                  2μl	+	#*PCR Products(ADH2,ENO1)
-	GeneⅢ(XP)  10/6                    6μl	+	#*Man→034
-	1-3A(EP)  10/9                      2μl	+	#*glr→031
-	10×T4 DNA ligase Buffer        2μｌ	+	#*ADH2→027
-	T4 DNA ligase                        0.5μｌ	+	#*ENO→029
-	DSW                                      7.5μｌ	+	#*Cel44A→075
-	total                                        20μｌ	+
-		+
-	051(C)	+
-	R2 (ES)  10/3                      6μl	+
-	022 (XP)  10/1                        2μl	+
-	1-3A(EP)  10/9                      2μl	+
-	10×T4 DNA ligase Buffer        2μｌ	+
-	T4 DNA ligase                        0.5μｌ	+
-	DSW                                      7.5μｌ	+
-	total                                        20μｌ	+
-		+
-	066(A)	+
-	3-2P (ES)  10/9  GE              4μl        (gel extract)	+
-	026 (EX)  10/9  GE                  4μl	+
-	10×T4 DNA ligase Buffer        2μｌ	+
-	T4 DNA ligase                        0.5μｌ	+
-	DSW                                      9.5μｌ	+
-	total                                        20μｌ	+
-		+
-	069(A)	+
-	049 (ES)  10/9  GE                4μl	+
-	026 (EX)  10/9  GE                  4μl	+
-	10×T4 DNA ligase Buffer        2μｌ	+
-	T4 DNA ligase                        0.5μｌ	+
-	DSW                                      9.5μｌ	+
-	total                                        20μｌ	+
-		+
-	070(A)	+
-	052 (ES)  10/9  GE                4μl	+
-	026 (EX)  10/9  GE                  4μl	+
-	10×T4 DNA ligase Buffer        2μｌ	+
-	T4 DNA ligase                        0.5μｌ	+
-	DSW                                      9.5μｌ	+
-	total                                        20μｌ	+
-		+
-	16℃  1h  ,80℃  20min	+
-		+
-	3.mini prep	+
-	058①,051②,016①,013②	+
-		+
-	4.Treatment of restriction enzyme	+
-	cut check (check and assembly)	+
-	016① 10/10        15μｌ	+
-	Xba I                    0.5μｌ	+
-	Pst I                    0.5μｌ	+
-	10×NEbuffer2          5μｌ	+
-	100×BSA              0.5μｌ	+
-	H2O                    28.5μｌ	+
-	total                      50μｌ	+
-		+
-	plasmid                15μｌ	+
-	EcoR I                    0.5μｌ	+
-	Spe I                      0.5μｌ	+
-	10×NEbuffer2          5μｌ	+
-	100×BSA                0.5μｌ	+
-	H2O                        28.5μｌ	+
-	total                        50μｌ	+
-		+
-	058①,013②,051②,1-13D,050①,025②	+
-		+
-	dye 2μｌ, sample 10μｌ, ladder 5μｌ.	+
-	1% Agalose gel  100V	+
-		+
-	5. Cel5B 3/4  α-agultinin PCR for DNA segment	+
-	thermal cycle	+
-	94℃  15sec	+
-	50℃  30sec	+
-	74℃  30sec        2cycle	+
-	↓add flanking primer	+
-	94℃  15sec	+
-	62℃  30sec	+
-	68℃  1min    35cycle	+
-	72℃  10min	+
-	4℃      ∞	+
-		+
-	5xPhusion HF Buffer        5μｌ	+
-	10mM dNTP                      0.4μｌ	+
-	tube  3                              0.2μｌ	+
-	Cel5B  1/2                      0.2μｌ	+
-	primer    rev                    0.2μｌ	+
-	fwd2                  0.2μｌ	+
-	phusion                          0.2μｌ	+
-	DSW                            13.6μｌ	+
-	total                                20μｌ	+
-		+
-	α-agultinin PCR for DNA segment	+
-	98℃  30sec	+
-	98℃  10sec	+
-	72℃  30sec        35cycle	+
-	72℃  10min	+
-	4℃　　　∞	+
-		+
-	5xPhusion HF Buffer        5μｌ	+
-	dNTPs                            0.4μｌ	+
-	primer    rev                    0.2μｌ	+
-	fwd                  0.2μｌ	+
-	phusion                          0.2μｌ	+
-	DSW                              14μｌ	+
-	total                                20μｌ	+
-		+
-	dye 2μｌ, sample , ladder 5μｌ.	+
-	1% Agalose gel  100V 25min	+
-		+
-	6.To liquid culture	+
-	1-13D,1-12M,1-23L,013,056,069-2,061 →culture	+
-	37℃ incubate  1:00~	+
-		+
-	7.Transformation	+
-	10/10 ligation  048,060,051,066,069,070,1-13D	+
-	compitent cell ①50μl＋DNA2μl	+
-	37℃ incubate  2:55~	+
-		+
-	8.PCR Products(ADH2,ENO1) treatment of restriction enzyme	+
-	PCR Products      15μｌ	+
-	EcoR I                    0.5μｌ	+
-	Spe I                      0.5μｌ	+
-	10×NEbuffer2          5μｌ	+
-	100×BSA                0.5μｌ	+
-	H2O                        28.5μｌ	+
-	total                        50μｌ	+
-		+
-	PCR Products(d)                    4μl	+
-	1-3A(ES,BB)                            4μl	+
-	10×T4 DNA ligase Buffer        2μｌ	+
-	T4 DNA ligase                        0.5μｌ	+
-	DSW                                      11.5μｌ	+
-	total                                          20μｌ	+
-	Man→034	+	#PCR for DNA segment
-	glr→031	+	#*Cel5B 3/4  α-agultinin
-	ADH2→027	+	#To liquid culture
-	ENO→029	+	#*1-13D,1-12M,1-23L,013,056,069-2,061 →culture
-	Cel44A→075	+	#Transformation
		+	#*048,060,051,066,069,070,1-13D

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Revision as of 20:09, 27 October 2010

October 10 (Sun)

1. Electrophoresis
2. Ligation
   • 048(C) R1 + FcenA
   • 060(C) 001-2 + GeneⅢ
   • 051(C) R2 + 022
   • 066(A) 3-2P + 026
   • 069(A) 049 + 026
   • 070(A) 052 + 026
3. mini prep
   • 058①,051②,016①,013②
4. cut check
   • 016①,058①,013②,051②,1-13D,050①,025②
   • PCR Products(ADH2,ENO1)
   • Man→034
   • glr→031
   • ADH2→027
   • ENO→029
   • Cel44A→075

1. PCR for DNA segment
   • Cel5B 3/4 α-agultinin
2. To liquid culture
   • 1-13D,1-12M,1-23L,013,056,069-2,061 →culture
3. Transformation
   • 048,060,051,066,069,070,1-13D