Team:HokkaidoU Japan/Notebook/September6
From 2010.igem.org
(Difference between revisions)
(→1-3A由来のpSB1C3と1-5A(RFP reporter)) |
(→1-3A由来のpSB1C3と1-5A(RFP reporter)) |
||
Line 2: | Line 2: | ||
=1-3A由来のpSB1C3と1-5A(RFP reporter)= | =1-3A由来のpSB1C3と1-5A(RFP reporter)= | ||
+ | |||
* 制限酵素処理をする前にプライマーなどを確実に除くため,PCR productsの[[ゲル抽出]]を行った | * 制限酵素処理をする前にプライマーなどを確実に除くため,PCR productsの[[ゲル抽出]]を行った | ||
* 次の組成で制限酵素処理を行った | * 次の組成で制限酵素処理を行った | ||
+ | |||
{|style="text-align:center; float: left;" class="protocol" | {|style="text-align:center; float: left;" class="protocol" | ||
!Reagent | !Reagent | ||
Line 107: | Line 109: | ||
|style="border-top:1px solid #996;"|'''50 uL''' | |style="border-top:1px solid #996;"|'''50 uL''' | ||
|} | |} | ||
+ | |||
<div style="clear:both;"></div> | <div style="clear:both;"></div> | ||
+ | |||
* これらをゲル抽し,25 uLのDNase free water | * これらをゲル抽し,25 uLのDNase free water | ||
* この時点でそれぞれ22.56 ng/uL,45.12 ng/uLとなっていると見積もられる | * この時点でそれぞれ22.56 ng/uL,45.12 ng/uLとなっていると見積もられる | ||
* pSB1C3 2 uL, RFP 3 uLにMighty Mix 5 uLとT4 ligase 0.5 uLを加え,Ligationした | * pSB1C3 2 uL, RFP 3 uLにMighty Mix 5 uLとT4 ligase 0.5 uLを加え,Ligationした | ||
* 50 uLのコンピテントセルをつかいTransformationした | * 50 uLのコンピテントセルをつかいTransformationした |
Revision as of 17:35, 27 September 2010
1-3A由来のpSB1C3と1-5A(RFP reporter)
- 制限酵素処理をする前にプライマーなどを確実に除くため,PCR productsのゲル抽出を行った
- 次の組成で制限酵素処理を行った
Reagent | Amount |
---|---|
RFP (1-5A) | 0.75 uL |
DW | 34.3 uL |
0.1% BSA | 5 uL |
10x M Buffer | 5 uL |
EcoR I | 2.5 uL |
Pst I | 2.5 uL |
Total | 50 uL |
Reagent | Amount |
---|---|
pSB1C3 | 0.75 uL |
DW | 34.3 uL |
0.1% BSA | 5 uL |
10x M Buffer | 5 uL |
EcoR I | 2.5 uL |
Pst I | 2.5 uL |
Total | 50 uL |
Reagent | Amount |
---|---|
RFP (1-5A) | 0.75 uL |
DW | 34.3 uL |
0.1% BSA | 5 uL |
10x H Buffer | 5 uL |
EcoR I | 2.5 uL |
Pst I | 2.5 uL |
Total | 50 uL |
Reagent | Amount |
---|---|
pSB1C3 | 0.75 uL |
DW | 34.3 uL |
0.1% BSA | 5 uL |
10x H Buffer | 5 uL |
EcoR I | 2.5 uL |
Pst I | 2.5 uL |
Total | 50 uL |
- これらをゲル抽し,25 uLのDNase free water
- この時点でそれぞれ22.56 ng/uL,45.12 ng/uLとなっていると見積もられる
- pSB1C3 2 uL, RFP 3 uLにMighty Mix 5 uLとT4 ligase 0.5 uLを加え,Ligationした
- 50 uLのコンピテントセルをつかいTransformationした