Team:HokkaidoU Japan/Notebook/September6

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(→1-3A由来のpSB1C3と1-5A（RFP reporter）)
(→1-3A由来のpSB1C3と1-5A（RFP reporter）)
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* 次の組成で制限酵素処理を行った
* 次の組成で制限酵素処理を行った
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!Reagent
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|RFP (1-5A)
|RFP (1-5A)
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|pSB1C3
|pSB1C3
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|RFP (1-5A)
|RFP (1-5A)
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!Reagent
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|pSB1C3
|pSB1C3

Revision as of 06:46, 20 September 2010

Notebook

1-3A由来のpSB1C3と1-5A（RFP reporter）

  • 制限酵素処理をする前にプライマーなどを確実に除くため，PCR productsのゲル抽出を行った
  • 次の組成で制限酵素処理を行った
Reagent Amount
RFP (1-5A) 0.75 uL
DW 34.3 uL
0.1% BSA 5 uL
10x M Buffer 5 uL
EcoR I 2.5 uL
Pst I 2.5 uL
Total 50 uL
Reagent Amount
pSB1C3 0.75 uL
DW 34.3 uL
0.1% BSA 5 uL
10x M Buffer 5 uL
EcoR I 2.5 uL
Pst I 2.5 uL
Total 50 uL
Reagent Amount
RFP (1-5A) 0.75 uL
DW 34.3 uL
0.1% BSA 5 uL
10x H Buffer 5 uL
EcoR I 2.5 uL
Pst I 2.5 uL
Total 50 uL
Reagent Amount
pSB1C3 0.75 uL
DW 34.3 uL
0.1% BSA 5 uL
10x H Buffer 5 uL
EcoR I 2.5 uL
Pst I 2.5 uL
Total 50 uL
  • これらをゲル抽し，25 uLのDNase free water
  • この時点でそれぞれ22.56 ng/uL，45.12 ng/uLとなっていると見積もられる
  • pSB1C3 2 uL, RFP 3 uLにMighty Mix 5 uLとT4 ligase 0.5 uLを加え，Ligationした
  • 50 uLのコンピテントセルをつかいTransformationした
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