Team:HokkaidoU Japan/Notebook/September6
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* 制限酵素処理をする前にプライマーなどを確実に除くため,PCR productsの[[ゲル抽出]]を行った | * 制限酵素処理をする前にプライマーなどを確実に除くため,PCR productsの[[ゲル抽出]]を行った | ||
* 次の組成で制限酵素処理を行った | * 次の組成で制限酵素処理を行った | ||
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|RFP (1-5A) | |RFP (1-5A) | ||
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- | {|style="text-align:center | + | {|style="text-align:center; float: left;" class="protocol" |
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|pSB1C3 | |pSB1C3 |
Revision as of 06:51, 19 September 2010
1-3A由来のpSB1C3と1-5A(RFP reporter)
- 制限酵素処理をする前にプライマーなどを確実に除くため,PCR productsのゲル抽出を行った
- 次の組成で制限酵素処理を行った
RFP (1-5A) | 0.75 uL |
DW | 34.3 uL |
0.1% BSA | 5 uL |
10x M Buffer | 5 uL |
EcoR I | 2.5 uL |
Pst I | 2.5 uL |
Total | 50 uL |
pSB1C3 | 0.75 uL |
DW | 34.3 uL |
0.1% BSA | 5 uL |
10x M Buffer | 5 uL |
EcoR I | 2.5 uL |
Pst I | 2.5 uL |
Total | 50 uL |
RFP (1-5A) | 0.75 uL |
DW | 34.3 uL |
0.1% BSA | 5 uL |
10x H Buffer | 5 uL |
EcoR I | 2.5 uL |
Pst I | 2.5 uL |
Total | 50 uL |
pSB1C3 | 0.75 uL |
DW | 34.3 uL |
0.1% BSA | 5 uL |
10x H Buffer | 5 uL |
EcoR I | 2.5 uL |
Pst I | 2.5 uL |
Total | 50 uL |
- これらをゲル抽し,25 uLのDNase free water
- この時点でそれぞれ22.56 ng/uL,45.12 ng/uLとなっていると見積もられる
- pSB1C3 2 uL, RFP 3 uLにMighty Mix 5 uLとT4 ligase 0.5 uLを加え,Ligationした
- 50 uLのコンピテントセルをつかいTransformationした