Team:HokkaidoU Japan/Notebook/September21
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+ | 1)アラビノースプロモーター、GFP、pSB1A3を以下の組成で調整した。 | ||
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+ | 94C 2min | ||
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+ | 35cycle | ||
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+ | という設定でPCRした。 | ||
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+ | 3)PCR後、10 ulのローディングバッファーを各サンプルに入れて1レーンにつき12 ul入れ泳動した。 | ||
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+ | 4)サンプルをゲルから抽出し、promegaのキットを用いて精製した。 | ||
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+ | 5)精製したサンプルを1 ul取り、1 ulのローディングバッファーを加えた後、6 ulのλ/Hind Ⅲ EcoRⅠとともに泳動した。 | ||
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Revision as of 09:27, 22 September 2010
Annealing of RBS made from oligos
Annealing of RBS (BBa_B0034) made from oligos
For this I ordered oligo primers for sigma
アラビノース依存型GFP発現装置の作成
パーツ情報
- GFP-doubleterminator
BBa_I13401 1-12K 875bp pSB1A2
- アラビノースプロモーター
BBa_I0050 3-20B 1210bp pSB2K3
- pSB1C3 2072bp
- pSB1A3 2157bp
1)アラビノースプロモーター、GFP、pSB1A3を以下の組成で調整した。
Reagent | Amount |
---|---|
Dw | 33 uL |
10×PCR buffur | 5 |
2mM 4dNTP | 5 |
MgSO4 | 3 |
Ex-F | 1 |
Ps-R | 1 |
KOD neo plus | 1 |
DNA | 1 |
Total | 50 uL |
2)
94C 2min
98C 10sec
68C 2min
35cycle
4C hold
という設定でPCRした。
3)PCR後、10 ulのローディングバッファーを各サンプルに入れて1レーンにつき12 ul入れ泳動した。
4)サンプルをゲルから抽出し、promegaのキットを用いて精製した。
5)精製したサンプルを1 ul取り、1 ulのローディングバッファーを加えた後、6 ulのλ/Hind Ⅲ EcoRⅠとともに泳動した。