Team:HokkaidoU Japan/Notebook/September1
From 2010.igem.org
(Difference between revisions)
(New page: {{Template:HokkaidoU_Japan}}) |
|||
Line 1: | Line 1: | ||
{{Template:HokkaidoU_Japan}} | {{Template:HokkaidoU_Japan}} | ||
+ | =1-5A(RFP reporter)のPCR= | ||
+ | {| | ||
+ | |- | ||
+ | | Autoclaved DW : | ||
+ | | 33 uL | ||
+ | |- | ||
+ | | 10x PCR buffer : | ||
+ | | 5 uL | ||
+ | |- | ||
+ | | 2 mM dNTPs : | ||
+ | | 5 uL | ||
+ | |- | ||
+ | | 25 mM MgSO<sub>4</sub> : | ||
+ | | 3 uL | ||
+ | |- | ||
+ | | 100 bp up primer : | ||
+ | | 1 uL | ||
+ | |- | ||
+ | | 200 bp down primer : | ||
+ | | 1 uL | ||
+ | |- | ||
+ | | KOD plus Neo : | ||
+ | | 1 uL | ||
+ | |- | ||
+ | | Template (1-5A) : | ||
+ | | 1 uL | ||
+ | |- | ||
+ | |style="border-top:1px solid #000;"|'''Total''' : | ||
+ | |style="border-top:1px solid #000;"| 50 uL | ||
+ | |} | ||
+ | |||
+ | * パーツは1069bp,primerは300bpのため,余裕を持ってExtensionは90秒で行った | ||
+ | * 得られたPCR solutionをMicrocon YM-10でろ過した | ||
+ | ===電気泳動=== | ||
+ | [[Image:HokkaidoU Japan 20100901a.JPG|200px|right|thumb|]] | ||
+ | pUC119,pSB1C3,1-5Aの濃度を測定するため,電気泳動した(各1 uL使用) | ||
+ | * 2: λ/''Hin''d III(2 uL) | ||
+ | * 3: pUC119 (3000bp): 10 ng/uL | ||
+ | * 4: pSB1C3 (2000bp): 20 ng/uL | ||
+ | * 5: 1-5A (1000bp): 80 ng/uL |
Revision as of 12:43, 18 September 2010
1-5A(RFP reporter)のPCR
Autoclaved DW : | 33 uL |
10x PCR buffer : | 5 uL |
2 mM dNTPs : | 5 uL |
25 mM MgSO4 : | 3 uL |
100 bp up primer : | 1 uL |
200 bp down primer : | 1 uL |
KOD plus Neo : | 1 uL |
Template (1-5A) : | 1 uL |
Total : | 50 uL |
- パーツは1069bp,primerは300bpのため,余裕を持ってExtensionは90秒で行った
- 得られたPCR solutionをMicrocon YM-10でろ過した
電気泳動
pUC119,pSB1C3,1-5Aの濃度を測定するため,電気泳動した(各1 uL使用)
- 2: λ/Hind III(2 uL)
- 3: pUC119 (3000bp): 10 ng/uL
- 4: pSB1C3 (2000bp): 20 ng/uL
- 5: 1-5A (1000bp): 80 ng/uL