Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August30
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+ | * バカ橋さんがDNAを入れ忘れたためやりなおし | ||
+ | * 残った18 uLにDW1 uLとDNAを加えて | ||
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+ | →2 uLを電気泳動で確認(+ 0.4 uL 6x SB) | ||
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+ | * レーン3ではモノマー,ダイマー,トライマーなどのプラスミドが見られる. | ||
+ | * レーン4~7ではこれらが切れているのが分かる | ||
+ | ** リニアになったので,モノマーの環状DNA(超コイル)より流れにくい | ||
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+ | |2 uL | ||
+ | |2 uL | ||
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+ | |0 uL | ||
+ | |2 uL | ||
+ | |2 uL | ||
+ | |2 uL | ||
+ | |- | ||
+ | |style="border-right:1px solid #000;"|EcoR I | ||
+ | |0 uL | ||
+ | |1 uL | ||
+ | |0 uL | ||
+ | |style="border-right:1px solid #000;"|1 uL | ||
+ | |0 uL | ||
+ | |1 uL | ||
+ | |0 uL | ||
+ | |style="border-right:1px solid #000;"|1 uL | ||
+ | |0 uL | ||
+ | |1 uL | ||
+ | |0 uL | ||
+ | |1 uL | ||
+ | |- | ||
+ | |style="border-right:1px solid #000;"|Pst I | ||
+ | |0 uL | ||
+ | |0 uL | ||
+ | |1 uL | ||
+ | |style="border-right:1px solid #000;"|1 uL | ||
+ | |0 uL | ||
+ | |0 uL | ||
+ | |1 uL | ||
+ | |style="border-right:1px solid #000;"|1 uL | ||
+ | |0 uL | ||
+ | |0 uL | ||
+ | |1 uL | ||
+ | |1 uL | ||
+ | |- | ||
+ | |style="border-right:1px solid #000; border-top:1px solid #000;"|Total | ||
+ | |style="border-top:1px solid #000;"|20 uL | ||
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+ | |style="border-top:1px solid #000;"|20 uL | ||
+ | |style="border-top:1px solid #000; border-right:1px solid #000;"|20 uL | ||
+ | |style="border-top:1px solid #000;"|20 uL | ||
+ | |style="border-top:1px solid #000;"|20 uL | ||
+ | |style="border-top:1px solid #000;"|20 uL | ||
+ | |style="border-top:1px solid #000; border-right:1px solid #000;"|20 uL | ||
+ | |style="border-top:1px solid #000;"|20 uL | ||
+ | |style="border-top:1px solid #000;"|20 uL | ||
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+ | |style="border-top:1px solid #000;"|20 uL | ||
+ | |} | ||
+ | [[Image:HokkaidoU Japan 20100830b.jpg|200px|right|thumb|]] | ||
+ | →同様にインキュベート&電気泳動 | ||
+ | ===電気泳動=== | ||
+ | * レーン2のマーカーはλ/''Hin''d III, EcoR I. | ||
+ | * レーン3のマーカーは50bp のラダーマーカー | ||
+ | * レーン5からは上の表の通り | ||
+ | * ちゃんと切れてる |
Revision as of 12:41, 18 September 2010
pUC119のEcoR I, Pst I digestion
- | EcoR I | Pst I | EcoR I, Pst I | 古いEcoR I | |
DNA solution | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL |
DW | 17 uL | 14 uL | 14 uL | 13 uL | 14 uL |
10x M buffer | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
0.1% BSA | - | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
EcoR I | - | 1 uL | - | 1 uL | 1 uL |
Pst I | - | - | 1 uL | 1 uL | - |
Total | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
→37℃, 60 min
→2 uLを電気泳動で確認
- バカ橋さんがDNAを入れ忘れたためやりなおし
- 残った18 uLにDW1 uLとDNAを加えて
→37℃, 60 min
→2 uLを電気泳動で確認(+ 0.4 uL 6x SB)
電気泳動
レーン | |
2 | λ/Hind III, EcoR I(4 uL使用) |
3 | 切ってない |
4 | EcoR I |
5 | Pst I |
6 | EcoR I + Pst I |
7 | 古いEcoR I |
- レーン3ではモノマー,ダイマー,トライマーなどのプラスミドが見られる.
- レーン4~7ではこれらが切れているのが分かる
- リニアになったので,モノマーの環状DNA(超コイル)より流れにくい
ラオリプライマーで作ったパーツも同様にdigestion
RBS | dT | GFP | ||||||||||
DNA | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL |
DW | 17 uL | 14 uL | 14 uL | 13 uL | 17 uL | 14 uL | 14 uL | 13 uL | 17 uL | 14 uL | 14 uL | 13 uL |
10x M buffer | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
0.1% BSA | 0 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 0 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 0 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
EcoR I | 0 uL | 1 uL | 0 uL | 1 uL | 0 uL | 1 uL | 0 uL | 1 uL | 0 uL | 1 uL | 0 uL | 1 uL |
Pst I | 0 uL | 0 uL | 1 uL | 1 uL | 0 uL | 0 uL | 1 uL | 1 uL | 0 uL | 0 uL | 1 uL | 1 uL |
Total | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
→同様にインキュベート&電気泳動
電気泳動
- レーン2のマーカーはλ/Hind III, EcoR I.
- レーン3のマーカーは50bp のラダーマーカー
- レーン5からは上の表の通り
- ちゃんと切れてる