Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August30

From 2010.igem.org

(Difference between revisions)
(ラオリプライマーで作ったパーツも同様にdigestion)
(pUC119のEcoR I, Pst I digestion)
Line 2: Line 2:
=pUC119のEcoR I, Pst I digestion=
=pUC119のEcoR I, Pst I digestion=
 +
{|border="1" style="text-align:center;" class="protocol"
{|border="1" style="text-align:center;" class="protocol"
|-
|-
Line 60: Line 61:
||'''20 uL'''
||'''20 uL'''
|}
|}
-
→37℃, 60 min<br>
+
 
-
→2 uLを電気泳動で確認
+
→Incubated at 37C for 60 min
-
* バカ橋さんがDNAを入れ忘れたためやりなおし
+
→Electrophoresed 2 uL for confirmation
-
* 残った18 uLにDW1 uLとDNAを加えて
+
* There were no bands, forgot to add DNA :(
 +
* 残った18 uLにDW 1 uLとDNAを加えて
→37℃, 60 min<br>
→37℃, 60 min<br>
→2 uLを電気泳動で確認(+ 0.4 uL 6x SB)
→2 uLを電気泳動で確認(+ 0.4 uL 6x SB)
-
===電気泳動===
+
 
 +
===Electrophoresis===
 +
 
[[Image:HokkaidoU Japan 20100830b.jpg‎|200px|right|thumb|]]
[[Image:HokkaidoU Japan 20100830b.jpg‎|200px|right|thumb|]]
{| class="protocol"
{| class="protocol"

Revision as of 08:50, 23 September 2010

pUC119のEcoR I, Pst I digestion

EcoR I Pst I E, P 古いEcoR I
DNA solution 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL
DW 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 14 uL
10x M buffer 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
0.1% BSA 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
EcoR I 1 uL 1 uL 1 uL
Pst I 1 uL 1 uL
Total 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL

→Incubated at 37C for 60 min →Electrophoresed 2 uL for confirmation

  • There were no bands, forgot to add DNA :(
  • 残った18 uLにDW 1 uLとDNAを加えて

→37℃, 60 min
→2 uLを電気泳動で確認(+ 0.4 uL 6x SB)

Electrophoresis

HokkaidoU Japan 20100830b.jpg
Lane DNA
2 λ/Hind III, EcoR I(4 uL使用)
3 切ってない
4 EcoR I
5 Pst I
6 EcoR I + Pst I
7 古いEcoR I
  • レーン3ではモノマー,ダイマー,トライマーなどのプラスミドが見られる.
  • レーン4~7ではこれらが切れているのが分かる
    • リニアになったので,モノマーの環状DNA(超コイル)より流れにくい

ラオリプライマーで作ったパーツも同様にdigestion

  RBS dT GFP
DNA 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL
DW 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL
10x M buffer 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
0.1% BSA 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
EcoR I 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL
Pst I 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL
Total 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL
HokkaidoU Japan 20100830a.jpg

→同様にインキュベート&電気泳動

電気泳動

  • マーカーはλ/Hind III, EcoR Iと50bp のラダーマーカー
  • ほかは上の表の通り
  • ちゃんと切れてる