Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August30
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(Difference between revisions)
(→ラオリプライマーで作ったパーツも同様にdigestion) |
(→pUC119のEcoR I, Pst I digestion) |
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=pUC119のEcoR I, Pst I digestion= | =pUC119のEcoR I, Pst I digestion= | ||
+ | |||
{|border="1" style="text-align:center;" class="protocol" | {|border="1" style="text-align:center;" class="protocol" | ||
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||'''20 uL''' | ||'''20 uL''' | ||
|} | |} | ||
- | + | ||
- | + | →Incubated at 37C for 60 min | |
- | * | + | →Electrophoresed 2 uL for confirmation |
- | * 残った18 | + | * There were no bands, forgot to add DNA :( |
+ | * 残った18 uLにDW 1 uLとDNAを加えて | ||
→37℃, 60 min<br> | →37℃, 60 min<br> | ||
→2 uLを電気泳動で確認(+ 0.4 uL 6x SB) | →2 uLを電気泳動で確認(+ 0.4 uL 6x SB) | ||
- | === | + | |
+ | ===Electrophoresis=== | ||
+ | |||
[[Image:HokkaidoU Japan 20100830b.jpg|200px|right|thumb|]] | [[Image:HokkaidoU Japan 20100830b.jpg|200px|right|thumb|]] | ||
{| class="protocol" | {| class="protocol" |
Revision as of 08:50, 23 September 2010
pUC119のEcoR I, Pst I digestion
- | EcoR I | Pst I | E, P | 古いEcoR I | |
DNA solution | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL |
DW | 17 uL | 14 uL | 14 uL | 13 uL | 14 uL |
10x M buffer | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
0.1% BSA | - | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
EcoR I | - | 1 uL | - | 1 uL | 1 uL |
Pst I | - | - | 1 uL | 1 uL | - |
Total | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
→Incubated at 37C for 60 min →Electrophoresed 2 uL for confirmation
- There were no bands, forgot to add DNA :(
- 残った18 uLにDW 1 uLとDNAを加えて
→37℃, 60 min
→2 uLを電気泳動で確認(+ 0.4 uL 6x SB)
Electrophoresis
Lane | DNA |
2 | λ/Hind III, EcoR I(4 uL使用) |
3 | 切ってない |
4 | EcoR I |
5 | Pst I |
6 | EcoR I + Pst I |
7 | 古いEcoR I |
- レーン3ではモノマー,ダイマー,トライマーなどのプラスミドが見られる.
- レーン4~7ではこれらが切れているのが分かる
- リニアになったので,モノマーの環状DNA(超コイル)より流れにくい
ラオリプライマーで作ったパーツも同様にdigestion
RBS | dT | GFP | ||||||||||
DNA | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL | 1 uL |
DW | 17 uL | 14 uL | 14 uL | 13 uL | 17 uL | 14 uL | 14 uL | 13 uL | 17 uL | 14 uL | 14 uL | 13 uL |
10x M buffer | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
0.1% BSA | - | 2 uL | 2 uL | 2 uL | - | 2 uL | 2 uL | 2 uL | - | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
EcoR I | - | 1 uL | - | 1 uL | - | 1 uL | - | 1 uL | - | 1 uL | - | 1 uL |
Pst I | - | - | 1 uL | 1 uL | - | - | 1 uL | 1 uL | - | - | 1 uL | 1 uL |
Total | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
→同様にインキュベート&電気泳動
電気泳動
- マーカーはλ/Hind III, EcoR Iと50bp のラダーマーカー
- ほかは上の表の通り
- ちゃんと切れてる