Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August30

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→37℃, 60 min<br>
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→2 uLを電気泳動で確認
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* バカ橋さんがDNAを入れ忘れたためやりなおし
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* 残った18 uLにDW1 uLとDNAを加えて
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→37℃, 60 min<br>
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→2 uLを電気泳動で確認（+ 0.4 uL 6x SB）
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===電気泳動===
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|レーン
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|λ/''Hin''d III, EcoR I（4 uL使用）
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* レーン３ではモノマー，ダイマー，トライマーなどのプラスミドが見られる．
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* レーン４～７ではこれらが切れているのが分かる
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** リニアになったので，モノマーの環状DNA（超コイル）より流れにくい
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==ラオリプライマーで作ったパーツも同様にdigestion==
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|colspan="4" style="border-right:1px solid #000; border-bottom:1px solid #000;"|RBS
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|colspan="4" style="border-right:1px solid #000; border-bottom:1px solid #000;"|dT
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|1 uL
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|1 uL
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|1 uL
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|14 uL
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|14 uL
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|14 uL
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|17 uL
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|14 uL
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|14 uL
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|13 uL
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|-
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|2 uL
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|2 uL
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|2 uL
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|2 uL
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|2 uL
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|2 uL
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|style="border-right:1px solid #000;"|2 uL
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|2 uL
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|2 uL
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|2 uL
 +
|2 uL
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|-
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|style="border-right:1px solid #000;"|0.1% BSA
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|0 uL
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|2 uL
 +
|2 uL
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|style="border-right:1px solid #000;"|2 uL
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|0 uL
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|2 uL
 +
|2 uL
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|style="border-right:1px solid #000;"|2 uL
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|0 uL
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|2 uL
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|2 uL
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|2 uL
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|-
 +
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|0 uL
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|1 uL
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|0 uL
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|style="border-right:1px solid #000;"|1 uL
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|0 uL
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|1 uL
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|-
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|1 uL
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|style="border-top:1px solid #000;"|20 uL
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|style="border-top:1px solid #000;"|20 uL
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|style="border-top:1px solid #000;"|20 uL
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→同様にインキュベート＆電気泳動
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===電気泳動===
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* レーン２のマーカーはλ/''Hin''d III, EcoR I．
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* レーン３のマーカーは50bp のラダーマーカー
 +
* レーン５からは上の表の通り
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* ちゃんと切れてる

Revision as of 12:41, 18 September 2010

pUC119のEcoR I, Pst I digestion

HokkaidoU Japan 20100830a.jpg
－ EcoR I Pst I EcoR I, Pst I 古いEcoR I
DNA solution 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL
DW 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 14 uL
10x M buffer 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
0.1% BSA － 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
EcoR I － 1 uL － 1 uL 1 uL
Pst I － － 1 uL 1 uL －
Total 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL

→37℃, 60 min
→2 uLを電気泳動で確認

  • バカ橋さんがDNAを入れ忘れたためやりなおし
  • 残った18 uLにDW1 uLとDNAを加えて

→37℃, 60 min
→2 uLを電気泳動で確認（+ 0.4 uL 6x SB）

電気泳動

レーン
2 λ/Hind III, EcoR I（4 uL使用）
3 切ってない
4 EcoR I
5 Pst I
6 EcoR I + Pst I
7 古いEcoR I
  • レーン３ではモノマー，ダイマー，トライマーなどのプラスミドが見られる．
  • レーン４～７ではこれらが切れているのが分かる
    • リニアになったので，モノマーの環状DNA（超コイル）より流れにくい


ラオリプライマーで作ったパーツも同様にdigestion

　 RBS dT GFP
DNA 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL
DW 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL
10x M buffer 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
0.1% BSA 0 uL 2 uL 2 uL 2 uL 0 uL 2 uL 2 uL 2 uL 0 uL 2 uL 2 uL 2 uL
EcoR I 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL
Pst I 0 uL 0 uL 1 uL 1 uL 0 uL 0 uL 1 uL 1 uL 0 uL 0 uL 1 uL 1 uL
Total 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL
HokkaidoU Japan 20100830b.jpg

→同様にインキュベート＆電気泳動

電気泳動

  • レーン２のマーカーはλ/Hind III, EcoR I．
  • レーン３のマーカーは50bp のラダーマーカー
  • レーン５からは上の表の通り
  • ちゃんと切れてる
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