Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August30

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(→ラオリプライマーで作ったパーツも同様にdigestion)
(→ラオリプライマーで作ったパーツも同様にdigestion)
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|style="border-right:1px solid #000;"|0.1% BSA
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|2 uL
|2 uL
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|2 uL
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|style="border-right:1px solid #000;"|EcoR I
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|style="border-right:1px solid #000;"|Pst I
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Revision as of 05:50, 19 September 2010

Notebook

pUC119のEcoR I, Pst I digestion

－ EcoR I Pst I E, P 古いEcoR I
DNA solution 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL
DW 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 14 uL
10x M buffer 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
0.1% BSA － 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
EcoR I － 1 uL － 1 uL 1 uL
Pst I － － 1 uL 1 uL －
Total 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL

→37℃, 60 min
→2 uLを電気泳動で確認

  • バカ橋さんがDNAを入れ忘れたためやりなおし
  • 残った18 uLにDW1 uLとDNAを加えて

→37℃, 60 min
→2 uLを電気泳動で確認（+ 0.4 uL 6x SB）

電気泳動

HokkaidoU Japan 20100830b.jpg
2 λ/Hind III, EcoR I（4 uL使用）
3 切ってない
4 EcoR I
5 Pst I
6 EcoR I + Pst I
7 古いEcoR I
  • レーン３ではモノマー，ダイマー，トライマーなどのプラスミドが見られる．
  • レーン４～７ではこれらが切れているのが分かる
    • リニアになったので，モノマーの環状DNA（超コイル）より流れにくい

ラオリプライマーで作ったパーツも同様にdigestion

　 RBS dT GFP
DNA 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL
DW 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL
10x M buffer 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
0.1% BSA － 2 uL 2 uL 2 uL － 2 uL 2 uL 2 uL － 2 uL 2 uL 2 uL
EcoR I － 1 uL － 1 uL － 1 uL － 1 uL － 1 uL － 1 uL
Pst I － － 1 uL 1 uL － － 1 uL 1 uL － － 1 uL 1 uL
Total 2－ 2－ 2－ 2－ 2－ 2－ 2－ 2－ 2－ 2－ 2－ 2－
HokkaidoU Japan 20100830a.jpg

→同様にインキュベート＆電気泳動

電気泳動

  • マーカーはλ/Hind III, EcoR Iと50bp のラダーマーカー
  • ほかは上の表の通り
  • ちゃんと切れてる
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