Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August30

From 2010.igem.org

(Difference between revisions)
(→pUC119のEcoR I, Pst I digestion)
Line 4: Line 4:
{|style="text-align:center;" class="protocol"
{|style="text-align:center;" class="protocol"
|-
|-
-
|style="border-bottom:1px solid;border-right:1px solid;"|
+
|style="border-bottom:1px;border-right:1px;"|
-
|style="border-bottom:1px solid;"|－
+
|style="border-bottom:1px;"|－
-
|style="border-bottom:1px solid;"|EcoR I
+
|style="border-bottom:1px;"|EcoR I
-
|style="border-bottom:1px solid;"|Pst I
+
|style="border-bottom:1px;"|Pst I
-
|style="border-bottom:1px solid;"|EcoR I, Pst I
+
|style="border-bottom:1px;"|EcoR I, Pst I
-
|style="border-bottom:1px solid;"|古いEcoR I
+
|style="border-bottom:1px;"|古いEcoR I
|-
|-
-
|style="border-right:1px solid;"|DNA solution
+
|style="border-right:1px;"|DNA solution
|1 uL
|1 uL
|1 uL
|1 uL
Line 18: Line 18:
|1 uL
|1 uL
|-
|-
-
|style="border-right:1px solid;"|DW
+
|style="border-right:1px;"|DW
|17 uL
|17 uL
|14 uL
|14 uL
Line 25: Line 25:
|14 uL
|14 uL
|-
|-
-
|style="border-right:1px solid;"|10x M buffer
+
|style="border-right:1px;"|10x M buffer
|2 uL
|2 uL
|2 uL
|2 uL
Line 32: Line 32:
|2 uL
|2 uL
|-
|-
-
|style="border-right:1px solid;"|0.1% BSA
+
|style="border-right:1px;"|0.1% BSA
|－
|－
|2 uL
|2 uL
Line 39: Line 39:
|2 uL
|2 uL
|-
|-
-
|style="border-right:1px solid;"|EcoR I
+
|style="border-right:1px;"|EcoR I
|－
|－
|1 uL
|1 uL
Line 46: Line 46:
|''1 uL''
|''1 uL''
|-
|-
-
|style="border-right:1px solid;"|Pst I
+
|style="border-right:1px;"|Pst I
|－
|－
|－
|－
Line 53: Line 53:
|－
|－
|-
|-
-
|style="border-top:1px solid;border-right:1px solid;"|'''Total'''
+
|style="border-top:1px;border-right:1px;"|'''Total'''
-
|style="border-top:1px solid;"|'''20 uL'''
+
|style="border-top:1px;"|'''20 uL'''
-
|style="border-top:1px solid;"|'''20 uL'''
+
|style="border-top:1px;"|'''20 uL'''
-
|style="border-top:1px solid;"|'''20 uL'''
+
|style="border-top:1px;"|'''20 uL'''
-
|style="border-top:1px solid;"|'''20 uL'''
+
|style="border-top:1px;"|'''20 uL'''
-
|style="border-top:1px solid;"|'''20 uL'''
+
|style="border-top:1px;"|'''20 uL'''
|}
|}
→37℃, 60 min<br>
→37℃, 60 min<br>
Line 99: Line 99:
{|style="text-align:center;" class="protocol"
{|style="text-align:center;" class="protocol"
|-
|-
-
|style="border-right:1px solid; border-bottom:1px solid;"|　
+
|style="border-right:1px; border-bottom:1px;"|　
-
|colspan="4" style="border-right:1px solid; border-bottom:1px solid;"|RBS
+
|colspan="4" style="border-right:1px; border-bottom:1px;"|RBS
-
|colspan="4" style="border-right:1px solid; border-bottom:1px solid;"|dT
+
|colspan="4" style="border-right:1px; border-bottom:1px;"|dT
-
|colspan="4" style="border-bottom:1px solid;"|GFP
+
|colspan="4" style="border-bottom:1px;"|GFP
|-
|-
-
|style="border-right:1px solid;"|DNA
+
|style="border-right:1px;"|DNA
|1 uL
|1 uL
|1 uL
|1 uL
|1 uL
|1 uL
-
|style="border-right:1px solid;"|1 uL
+
|style="border-right:1px;"|1 uL
|1 uL
|1 uL
|1 uL
|1 uL
|1 uL
|1 uL
-
|style="border-right:1px solid;"|1 uL
+
|style="border-right:1px;"|1 uL
|1 uL
|1 uL
|1 uL
|1 uL
Line 118: Line 118:
|1 uL
|1 uL
|-
|-
-
|style="border-right:1px solid;"|DW
+
|style="border-right:1px;"|DW
|17 uL
|17 uL
|14 uL
|14 uL
|14 uL
|14 uL
-
|style="border-right:1px solid;"|13 uL
+
|style="border-right:1px;"|13 uL
|17 uL
|17 uL
|14 uL
|14 uL
|14 uL
|14 uL
-
|style="border-right:1px solid;"|13 uL
+
|style="border-right:1px;"|13 uL
|17 uL
|17 uL
|14 uL
|14 uL
Line 132: Line 132:
|13 uL
|13 uL
|-
|-
-
|style="border-right:1px solid;"|10x M buffer
+
|style="border-right:1px;"|10x M buffer
|2 uL
|2 uL
|2 uL
|2 uL
|2 uL
|2 uL
-
|style="border-right:1px solid;"|2 uL
+
|style="border-right:1px;"|2 uL
|2 uL
|2 uL
|2 uL
|2 uL
|2 uL
|2 uL
-
|style="border-right:1px solid;"|2 uL
+
|style="border-right:1px;"|2 uL
|2 uL
|2 uL
|2 uL
|2 uL
Line 146: Line 146:
|2 uL
|2 uL
|-
|-
-
|style="border-right:1px solid;"|0.1% BSA
+
|style="border-right:1px;"|0.1% BSA
|0 uL
|0 uL
|2 uL
|2 uL
|2 uL
|2 uL
-
|style="border-right:1px solid;"|2 uL
+
|style="border-right:1px;"|2 uL
|0 uL
|0 uL
|2 uL
|2 uL
|2 uL
|2 uL
-
|style="border-right:1px solid;"|2 uL
+
|style="border-right:1px;"|2 uL
|0 uL
|0 uL
|2 uL
|2 uL
Line 160: Line 160:
|2 uL
|2 uL
|-
|-
-
|style="border-right:1px solid;"|EcoR I
+
|style="border-right:1px;"|EcoR I
|0 uL
|0 uL
|1 uL
|1 uL
|0 uL
|0 uL
-
|style="border-right:1px solid;"|1 uL
+
|style="border-right:1px;"|1 uL
|0 uL
|0 uL
|1 uL
|1 uL
|0 uL
|0 uL
-
|style="border-right:1px solid;"|1 uL
+
|style="border-right:1px;"|1 uL
|0 uL
|0 uL
|1 uL
|1 uL
Line 174: Line 174:
|1 uL
|1 uL
|-
|-
-
|style="border-right:1px solid;"|Pst I
+
|style="border-right:1px;"|Pst I
|0 uL
|0 uL
|0 uL
|0 uL
|1 uL
|1 uL
-
|style="border-right:1px solid;"|1 uL
+
|style="border-right:1px;"|1 uL
|0 uL
|0 uL
|0 uL
|0 uL
|1 uL
|1 uL
-
|style="border-right:1px solid;"|1 uL
+
|style="border-right:1px;"|1 uL
|0 uL
|0 uL
|0 uL
|0 uL
Line 188: Line 188:
|1 uL
|1 uL
|-
|-
-
|style="border-right:1px solid; border-top:1px solid;"|Total
+
|style="border-right:1px; border-top:1px;"|Total
-
|style="border-top:1px solid;"|20 uL
+
|style="border-top:1px;"|20 uL
-
|style="border-top:1px solid;"|20 uL
+
|style="border-top:1px;"|20 uL
-
|style="border-top:1px solid;"|20 uL
+
|style="border-top:1px;"|20 uL
-
|style="border-top:1px solid; border-right:1px solid;"|20 uL
+
|style="border-top:1px; border-right:1px;"|20 uL
-
|style="border-top:1px solid;"|20 uL
+
|style="border-top:1px;"|20 uL
-
|style="border-top:1px solid;"|20 uL
+
|style="border-top:1px;"|20 uL
-
|style="border-top:1px solid;"|20 uL
+
|style="border-top:1px;"|20 uL
-
|style="border-top:1px solid; border-right:1px solid;"|20 uL
+
|style="border-top:1px; border-right:1px;"|20 uL
-
|style="border-top:1px solid;"|20 uL
+
|style="border-top:1px;"|20 uL
-
|style="border-top:1px solid;"|20 uL
+
|style="border-top:1px;"|20 uL
-
|style="border-top:1px solid;"|20 uL
+
|style="border-top:1px;"|20 uL
-
|style="border-top:1px solid;"|20 uL
+
|style="border-top:1px;"|20 uL
|}
|}
[[Image:HokkaidoU Japan 20100830a.jpg‎|200px|right|thumb|]]
[[Image:HokkaidoU Japan 20100830a.jpg‎|200px|right|thumb|]]

Revision as of 05:45, 19 September 2010

Notebook

pUC119のEcoR I, Pst I digestion

－ EcoR I Pst I EcoR I, Pst I 古いEcoR I
DNA solution 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL
DW 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 14 uL
10x M buffer 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
0.1% BSA － 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
EcoR I － 1 uL － 1 uL 1 uL
Pst I － － 1 uL 1 uL －
Total 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL

→37℃, 60 min
→2 uLを電気泳動で確認

  • バカ橋さんがDNAを入れ忘れたためやりなおし
  • 残った18 uLにDW1 uLとDNAを加えて

→37℃, 60 min
→2 uLを電気泳動で確認（+ 0.4 uL 6x SB）

電気泳動

HokkaidoU Japan 20100830b.jpg
レーン
2 λ/Hind III, EcoR I（4 uL使用）
3 切ってない
4 EcoR I
5 Pst I
6 EcoR I + Pst I
7 古いEcoR I
  • レーン３ではモノマー，ダイマー，トライマーなどのプラスミドが見られる．
  • レーン４～７ではこれらが切れているのが分かる
    • リニアになったので，モノマーの環状DNA（超コイル）より流れにくい


ラオリプライマーで作ったパーツも同様にdigestion

　 RBS dT GFP
DNA 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL 1 uL
DW 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL 17 uL 14 uL 14 uL 13 uL
10x M buffer 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL 2 uL
0.1% BSA 0 uL 2 uL 2 uL 2 uL 0 uL 2 uL 2 uL 2 uL 0 uL 2 uL 2 uL 2 uL
EcoR I 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL 0 uL 1 uL
Pst I 0 uL 0 uL 1 uL 1 uL 0 uL 0 uL 1 uL 1 uL 0 uL 0 uL 1 uL 1 uL
Total 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL 20 uL
HokkaidoU Japan 20100830a.jpg

→同様にインキュベート＆電気泳動

電気泳動

  • マーカーはλ/Hind III, EcoR Iと50bp のラダーマーカー
  • ほかは上の表の通り
  • ちゃんと切れてる
Retrieved from "http://2010.igem.org/Team:HokkaidoU_Japan/Notebook/August30"