Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August24

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レーン６のプロモータはバンドが見られなかった
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* 配列を確認したところ，ラオリプライマーが対応していないベクターに載っていた．
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Ligation Mixture「I」とLigation Mixture「M」について
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* PCRで増やしてゲル抽したpSB1C3 2 uLにLigation Mixture 4 uLをいれ，それぞれのTransformationした
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* LB 200 uLを加え，100 uLずつをChloramphenicol 34 ug/uLと 12 ug/uLの培地にまいた
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|ラオリプライマーによる1-2NのPCRのろ過（下）
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レーン３でバンドが見られなかった．
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* ダイマー，テトラマーなど，さまざまな断片ができ，薄くなってしまった？
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レーン７は薄いがバンドが確認できた
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* ゲル抽に問題はない

Revision as of 11:59, 18 September 2010

ラオリプライマーで増やしたパーツの確認

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  • ４つのPCR productsをそれぞれMicrocon YM-10でろ過し，電気泳動にかけた
1 TSUDA Marker I
3 RBS
4 GFP
5 double terminator
6 Promotor

レーン６のプロモータはバンドが見られなかった

  • 配列を確認したところ，ラオリプライマーが対応していないベクターに載っていた．


Ligation Mixtureのチェック

Ligation Mixture「I」とLigation Mixture「M」について

  • PCRで増やしてゲル抽したpSB1C3 2 uLにLigation Mixture 4 uLをいれ，それぞれのTransformationした
  • LB 200 uLを加え，100 uLずつをChloramphenicol 34 ug/uLと 12 ug/uLの培地にまいた

いろいろ確認

HokkaidoU Japan 20100824b.jpg

レーン

2 λ/Hind III
3 pSB1C3どうしのLigation
4 ラオリプライマーによる1-2NのPCRのろ過産物（上）
5 ラオリプライマーによる1-2NのPCRのろ過（下）
6 λ/Hind III
7 ゲル抽したpSB1C3

レーン３でバンドが見られなかった．

  • ダイマー，テトラマーなど，さまざまな断片ができ，薄くなってしまった？

レーン７は薄いがバンドが確認できた

  • ゲル抽に問題はない
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