Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August19

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(Difference between revisions)
(→Ligation)
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{|class="protocol"
{|class="protocol"
|-
|-
-
|style="border-bottom:1px solid #000;"|パーツ
+
!パーツ
-
|style="border-bottom:1px solid #000;"|Markerと比べて (ng/uL)
+
!Markerと比べて (ng/uL)
-
|style="border-bottom:1px solid #000;"|size (bp)
+
!size (bp)
-
|style="border-bottom:1px solid #000;"|必要 (ng)
+
!必要 (ng)
-
|style="border-bottom:1px solid #000;"|使用 (uL)
+
!使用 (uL)
|-
|-
|Vector
|Vector
|5 ng/uL
|5 ng/uL
-
|2000 bp
+
|2996 bp
|10 ng
|10 ng
|2 uL
|2 uL
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|1 uL
|1 uL
|-
|-
-
|style="border-top:1px solid #000;" colspan="4"|'''Total'''
+
|style="border-top:1px solid #996;" colspan="4"|'''Total'''
-
|style="border-top:1px solid #000;"|'''3.3 uL'''
+
|style="border-top:1px solid #996;"|'''3.3 uL'''
|}
|}
その後は，先日のLigation & Transformationと同じく．
その後は，先日のLigation & Transformationと同じく．
-
 
=competencyを求める=
=competencyを求める=

Revision as of 07:03, 20 September 2010

Notebook

Ligation

VectorにHeat shock promotorとRBSを組み込む

パーツ Markerと比べて (ng/uL) size (bp) 必要 (ng) 使用 (uL)
Vector 5 ng/uL 2996 bp 10 ng 2 uL
Heat shock promotor 25 ng/uL 800 bp 8 ng 0.3 uL
RBS 1 ng/uL 50 bp 1 ng 1 uL
Total 3.3 uL

その後は，先日のLigation & Transformationと同じく．

competencyを求める

  1. 0.35 ug/uLのpUC119 DNAを1 uL 0.5 mLチューブにとり，2.5 uLのDWを加えた (0.1 ug/uL)
  2. 999 uLのDWを1.5 mLチューブにとり，1 uLの[1]を加えた (0.1 ng/uL)
  3. 99 uLのDWを1.5 mLチューブにとり，1 uLの[2]を加えた (1 pg/uL)

1 pg/uLのpUC119 DNAを「青α」と「赤α」のコンピテントセルに，それぞれ1 uL, 10 uL, 100 uLずつ加え，Transformationさせた


VectorだけでLigation，Transformation

前日のLigationでコロニーができなかったので，ベクターに問題があるかもしれない．

  • pSB1C3 2 uLにligation solution 2 uLとT4 ligase 0.4 uLを加えた
  • Transformation
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