Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August19

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=Ligation=
=Ligation=
VectorにHeat shock promotorとRBSを組み込む
VectorにHeat shock promotorとRBSを組み込む

Revision as of 14:54, 18 September 2010

Notebook

Ligation

VectorにHeat shock promotorとRBSを組み込む

パーツ Markerと比べて (ng/uL) size (bp) 必要 (ng) 使用 (uL)
Vector 5 ng/uL 2000 bp 10 ng 2 uL
Heat shock promotor 25 ng/uL 800 bp 8 ng 0.3 uL
RBS 1 ng/uL 50 bp 1 ng 1 uL
Total 3.3 uL

その後は，先日のLigation & Transformationと同じく．


competencyを求める

  1. 0.35 ug/uLのpUC119 DNAを1 uL 0.5 mLチューブにとり，2.5 uLのDWを加えた (0.1 ug/uL)
  2. 999 uLのDWを1.5 mLチューブにとり，1 uLの[1]を加えた (0.1 ng/uL)
  3. 99 uLのDWを1.5 mLチューブにとり，1 uLの[2]を加えた (1 pg/uL)

1 pg/uLのpUC119 DNAを「青α」と「赤α」のコンピテントセルに，それぞれ1 uL, 10 uL, 100 uLずつ加え，Transformationさせた


VectorだけでLigation，Transformation

前日のLigationでコロニーができなかったので，ベクターに問題があるかもしれない．

  • pSB1C3 2 uLにligation solution 2 uLとT4 ligase 0.4 uLを加えた
  • Transformation
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