Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August19
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=VectorだけでLigation,Transformation= | =VectorだけでLigation,Transformation= | ||
- | + | 前日のLigationでコロニーができなかったので,ベクターに問題があるかもしれない.<br> | |
* pSB1C3 2 uLにligation solution 2 uLとT4 ligase 0.4 uLを加えた | * pSB1C3 2 uLにligation solution 2 uLとT4 ligase 0.4 uLを加えた | ||
* Transformation | * Transformation |
Revision as of 11:55, 18 September 2010
Ligation
VectorにHeat shock promotorとRBSを組み込む
パーツ | Markerと比べて (ng/uL) | size (bp) | 必要 (ng) | 使用 (uL) |
Vector | 5 ng/uL | 2000 bp | 10 ng | 2 uL |
Heat shock promotor | 25 ng/uL | 800 bp | 8 ng | 0.3 uL |
RBS | 1 ng/uL | 50 bp | 1 ng | 1 uL |
Total | 3.3 uL |
その後は,先日のLigation & Transformationと同じく.
competencyを求める
- 0.35 ug/uLのpUC119 DNAを1 uL 0.5 mLチューブにとり,2.5 uLのDWを加えた (0.1 ug/uL)
- 999 uLのDWを1.5 mLチューブにとり,1 uLの[1]を加えた (0.1 ng/uL)
- 99 uLのDWを1.5 mLチューブにとり,1 uLの[2]を加えた (1 pg/uL)
1 pg/uLのpUC119 DNAを「青α」と「赤α」のコンピテントセルに,それぞれ1 uL, 10 uL, 100 uLずつ加え,Transformationさせた
VectorだけでLigation,Transformation
前日のLigationでコロニーができなかったので,ベクターに問題があるかもしれない.
- pSB1C3 2 uLにligation solution 2 uLとT4 ligase 0.4 uLを加えた
- Transformation