Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August19

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=Ligation=
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VectorにHeat shock promotorとRBSを組み込む
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|style="border-bottom:1px solid #000;"|パーツ
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|style="border-bottom:1px solid #000;"|Markerと比べて (ng/uL)
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|style="border-bottom:1px solid #000;"|size (bp)
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|style="border-bottom:1px solid #000;"|必要 (ng)
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|style="border-bottom:1px solid #000;"|使用 (uL)
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|Vector
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|5 ng/uL
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|2000 bp
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|10 ng
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|2 uL
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|Heat shock promotor
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|25 ng/uL
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|800 bp
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|8 ng
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|0.3 uL
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|RBS
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|1 ng/uL
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|50 bp
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|1 ng
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|1 uL
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|-
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|style="border-top:1px solid #000;" colspan="4"|'''Total'''
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|style="border-top:1px solid #000;"|'''3.3 uL'''
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|}
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その後は，先日の[[実験記録/20100818#Ligation & Transformation|Ligation & Transformation]]と同じく．
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=competencyを求める=
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# 0.35 ug/uLのpUC119 DNAを1 uL 0.5 mLチューブにとり，2.5 uLのDWを加えた (0.1 ug/uL)
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# 999 uLのDWを1.5 mLチューブにとり，1 uLの[1]を加えた (0.1 ng/uL)
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# 99 uLのDWを1.5 mLチューブにとり，1 uLの[2]を加えた (1 pg/uL)
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1 pg/uLのpUC119 DNAを「青α」と「赤α」のコンピテントセルに，それぞれ1 uL, 10 uL, 100 uLずつ加え，Transformationさせた
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=VectorだけでLigation，Transformation=
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前日の[[実験記録/20100819#Ligation]]でコロニーができなかったので，ベクターに問題があるかもしれない．<br>
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* pSB1C3 2 uLにligation solution 2 uLとT4 ligase 0.4 uLを加えた
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* Transformation

Revision as of 11:54, 18 September 2010

Ligation

VectorにHeat shock promotorとRBSを組み込む

パーツ Markerと比べて (ng/uL) size (bp) 必要 (ng) 使用 (uL)
Vector 5 ng/uL 2000 bp 10 ng 2 uL
Heat shock promotor 25 ng/uL 800 bp 8 ng 0.3 uL
RBS 1 ng/uL 50 bp 1 ng 1 uL
Total 3.3 uL

その後は，先日のLigation & Transformationと同じく．


competencyを求める

  1. 0.35 ug/uLのpUC119 DNAを1 uL 0.5 mLチューブにとり，2.5 uLのDWを加えた (0.1 ug/uL)
  2. 999 uLのDWを1.5 mLチューブにとり，1 uLの[1]を加えた (0.1 ng/uL)
  3. 99 uLのDWを1.5 mLチューブにとり，1 uLの[2]を加えた (1 pg/uL)

1 pg/uLのpUC119 DNAを「青α」と「赤α」のコンピテントセルに，それぞれ1 uL, 10 uL, 100 uLずつ加え，Transformationさせた


VectorだけでLigation，Transformation

前日の実験記録/20100819#Ligationでコロニーができなかったので，ベクターに問題があるかもしれない．

  • pSB1C3 2 uLにligation solution 2 uLとT4 ligase 0.4 uLを加えた
  • Transformation
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