Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August12

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Revision as of 14:51, 18 September 2010

Notebook

電気泳動１

HokkaidoU Japan 20100812a.jpg

前日のPCR産物のligationの結果を電気泳動で確かめた

  • 4 uLの6x Sample Bufferを入れたもののうち、12 uLを流した
  • エチジウムブロマイドは20 uL使用した

mini prep

  • LB液体培地で18時間培養した菌を使用した
    • 1-18Fは生育が悪かった
  • Chloroformのあと遠心し、430 uLの上清をとった
  • 1-18Fは2-プロパノールを入れたあと，遠心しても沈殿がほとんど得られなかった
  • 最後に30 uLのTEに溶かし、電気泳動をした

電気泳動２

HokkaidoU Japan 20100812b.jpg
HokkaidoU Japan 20100812c.jpg

mini prepで得たプラスミドとPCRで得たパーツのDNAを電気泳動で確認した
制限酵素処理はしないので、反応系は以下の通り

１ ２ ３ ４ ５ ６
Parts 1-18F 2-21H 2-11P 2-24G 1-2M 3-1E
DNA solution 2 uL 2 2 1 1 1
6x Sample Buffer 0.4 uL 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
  • マーカーはλ/HindIIIとpUC119/HinfIを使用
  • レーン１のマーカー（λ/HindIII）はウェルから流れ出てしまった
  • レーン３（mini prepのサンプル，1-18F）はバンドが確認できなかった（後日PCR）
  • レーン４ではplasmidのダイマー，トライマーがよく確認できる（plasmidの電気泳動ではよくあるらしい）
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