Team:HokkaidoU Japan/Notebook/August12

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* 4 uLの6x Sample Bufferを入れたもののうち、12 uLを流した
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* エチジウムブロマイドは20 uL使用した
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* LB液体培地で18時間培養した菌を使用した
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** 1-18Fは生育が悪かった
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* Chloroformのあと遠心し、430 uLの上清をとった
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* 1-18Fは2-プロパノールを入れたあと，遠心しても沈殿がほとんど得られなかった
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* 最後に30 uLのTEに溶かし、電気泳動をした
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mini prepで得たプラスミドとPCRで得たパーツのDNAを電気泳動で確認した<br>
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制限酵素処理はしないので、反応系は以下の通り
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|style="border-bottom:1px solid #000;"| ４
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|style="border-bottom:1px solid #000;"| ５
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|style="border-bottom:1px solid #000;"| ６
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|-
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|style="border-right:1px solid #000;"| Parts
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| 1-18F
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| 2-21H
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| 2-11P
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| 2-24G
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| 1-2M
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| 3-1E
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|-
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|style="border-right:1px solid #000;"| DNA solution
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| 2 uL
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| 2
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| 2
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| 1
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| 1
 +
| 1
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|-
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|style="border-right:1px solid #000;"| 6x Sample Buffer
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| 0.4 uL
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| 0.4
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| 0.4
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| 0.4
 +
| 0.4
 +
| 0.4
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|}
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* マーカーはλ/''Hin''dIIIとpUC119/''Hin''fIを使用
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* レーン１のマーカー（λ/''Hin''dIII）はウェルから流れ出てしまった
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* レーン３（mini prepのサンプル，1-18F）はバンドが確認できなかった（後日PCR）
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* レーン４ではplasmidのダイマー，トライマーがよく確認できる（plasmidの電気泳動ではよくあるらしい）

Revision as of 11:30, 18 September 2010

電気泳動１

HokkaidoU Japan 20100812a.jpg

前日のPCR産物のligationの結果を電気泳動で確かめた

  • 4 uLの6x Sample Bufferを入れたもののうち、12 uLを流した
  • エチジウムブロマイドは20 uL使用した

mini prep

  • LB液体培地で18時間培養した菌を使用した
    • 1-18Fは生育が悪かった
  • Chloroformのあと遠心し、430 uLの上清をとった
  • 1-18Fは2-プロパノールを入れたあと，遠心しても沈殿がほとんど得られなかった
  • 最後に30 uLのTEに溶かし、電気泳動をした

電気泳動２

HokkaidoU Japan 20100812b.jpg
HokkaidoU Japan 20100812c.jpg

mini prepで得たプラスミドとPCRで得たパーツのDNAを電気泳動で確認した
制限酵素処理はしないので、反応系は以下の通り

１ ２ ３ ４ ５ ６
Parts 1-18F 2-21H 2-11P 2-24G 1-2M 3-1E
DNA solution 2 uL 2 2 1 1 1
6x Sample Buffer 0.4 uL 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
  • マーカーはλ/HindIIIとpUC119/HinfIを使用
  • レーン１のマーカー（λ/HindIII）はウェルから流れ出てしまった
  • レーン３（mini prepのサンプル，1-18F）はバンドが確認できなかった（後日PCR）
  • レーン４ではplasmidのダイマー，トライマーがよく確認できる（plasmidの電気泳動ではよくあるらしい）
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